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本研究对针对生产中,马尾松松材线虫病病木中病原线虫松材线虫难以快速检测的难题,根据植物病理学理论,在调查马尾松松材线虫病疫区内马尾松枯死木线虫种类,并研究松材线虫取样技术的基础上,引用分子生物学技术对松材线虫检测技术进行了研究,取得了以下结果:
L本研究调查鉴定出广州市郊松材线虫病疫区内马尾松病死树中共有10种线虫:畸刺伞滑刃线虫(Bursaphelenchusteratospicularis)、松材线虫(B.xylophilus)、拟松材线虫(B.mucronatus)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)、小角伞滑刃线虫(B.corneolus)、利昂伞滑刃线虫(B.1eoni)、湖南伞滑刃线虫(B.hunanensis)、滑刃属线虫(Aphelenchoidesspp.)、剑尾齿杆双胃线虫(Odorhabdiplogasterxiphocaudatus)和寄生小杆属线虫(Parasitorhabditisspp.)。其中畸刺伞滑刃线虫为中国新纪录种。无论是数量上或种类上,均以伞滑刃属线虫为优势种群。
2.本研究用方差分析和多重比较的方法,发现广州市马尾松病死木中松材线虫的分布不同高度之间是不均匀的;松材线虫在树干中的分布以树冠基部最多。这些结果对松材线虫病采样,具有重要的意义。
3.本研究设计出一对松材线虫的特异性引物:上游引物P155:5-CTACGTGCTGTFGTFGAGTFGGC-3,下游引物P5385-TGGTGCCTAACATFGCGCGA-3’。引物可以有效地从松材线虫DNA中扩增出大小为403bp的DNA片段,并且利用该引物可以把松材线自马尾松DNA及本次自马尾松枯死木中鉴定的其它线虫包括:滑刃属线虫、松材线虫、拟松材线虫、变异伞滑刃线虫、小角伞滑刃线虫、利昂伞滑刃线虫、湖南伞滑刃线虫、畸刺伞滑刃线虫、剑尾齿杆双胃线虫、寄生小杆属线虫鉴别出来。
4.本研究建立了直接从马尾松病木中,通过PCR特异性扩增直接检测线虫的反应体系。利用该反应体系,可以成功地检测出1-2μg的马尾松病木中的单条松材线虫。在1一2μg的松木粒中只有一条松材线虫时,检出的机率为70%;在松材线虫密度大于300条/克时,检测出松材线虫的机率为50%。该技术对及时发现早期疫点,有效的将松材线虫病控制在一定的范围内,并进而缩小松材线虫病的发生范围,具有重要的生产意义。开发出的技术在政府决策、林业检疫及生产部门中,具有广阔的应用前景。