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背景成人T细胞白血病(ATL)是由人类T淋巴细胞病毒(HTLV-1)感染的恶性T淋巴细胞增殖性疾病。病毒蛋白Tax通过调控多个细胞增殖及抗凋亡相关基因,从而促使T细胞恶性转化为ATL细胞。Fas/FasL凋亡信号途径是调控T细胞免疫应答稳态和功能性的重要方式。当激活的效应T细胞完成清除病原体,通过Fas/FasL凋亡信号途径促使激活的效应T细胞凋亡。Fas是一种跨膜蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,当FasL与其结合,激活Fas并通过其死亡结构域与胞内衔接蛋白形成死亡诱导信号复合体,进而激活Caspase-8、3、7等凋亡级联信号,从而促进凋亡的发生。而ATL细胞对Fas/Fas L凋亡信号具有抵抗作用,其机制与HTLV-1转录激活蛋白Tax介导的细胞凋亡抑制蛋白c-FLIP上调有关。c-FLIP是抗凋亡调节蛋白,其在结构上与Caspase-8具有相似性,但其不具有酶活性,其与Fas死亡结构域结合阻止Fas/FasL凋亡下游信号激活,起到对Fas/FasL凋亡信号途径负调节作用。Sirtuin1(SIRT1)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的去乙酰化酶,能通过去乙酰化多种蛋白底物阻断细胞衰老及凋亡,促进细胞增殖存活。而且临床显示,ATL细胞中SIRT1也呈现高表达水平,但其是否参与Fas/FasL凋亡信号途径调节目前仍不清楚。目的探讨Sirtuin 1在Fas/FasL凋亡信号抵抗的ATL细胞的作用及可能的分子机制,为临床ATL的预防及治疗提供实验数据及理论指导。方法1.采用MTS法,检测不同浓度的重组蛋白FasL及SIRT1抑制剂Salermide对ATL细胞生长增殖影响;2.采用Annexin V-FITC和PI双染法,检测不同浓度重组蛋白FasL对ATL细胞凋亡的影响,以及SIRT1抑制剂或RNAi技术处理后,对Fas/FasL诱导的ATL细胞凋亡的影响;3.采用Western Blot和RNAi技术,从蛋白水平检测ATL细胞中SIRT1、c-FLIP抗凋亡相关蛋白表达水平及p65乙酰化情况;4.采用c-FLIP基因启动子荧光报告基因系统,检测SIRT1表达质粒、Tax表达质粒共转染,对c-FLIP基因启动子荧光报告信号的影响;5.采用免疫荧光显色方法,检测共转染SIRT1表达质粒与cherry荧光Tax融合表达质粒的细胞免疫荧光染色后,SIRT1与Tax细胞内共定位关系。结果1.使用10 ng/ml FasL处理ATL细胞,与对照Jurkat细胞的40±2.06%存活率比较,ATL细胞存活率达到85±2.73%;同时Jurkat细胞的凋亡率达到76.74±0.6%,ATL细胞凋亡率为7.05±0.5%;2.与对照Jurkat细胞比较,SIRT1抑制剂Salermide 25μM处理ATL细胞,其存活率降低25%,凋亡率明显增加。同时,RNAi敲低SIRT1的ATL细胞,其凋亡率也显著增加,达到20±1.65%;3.与Jurkat细胞相比,ATL细胞中抗凋亡相关蛋白SIRT1与c-FLIP表达水平明显升高。而敲低SIRT1后,p65乙酰化水平降低,c-FLIP蛋白的表达水平也呈明显降低。4.不同浓度的Tax表达质粒共转染,对c-FLIP基因启动子荧光报告基因信号呈现剂量依赖性增高;5.免疫染色绿色荧光的SIRT1与红色cherry荧光的Tax在细胞的胞浆及胞核内都有共定位。结论Sirtuin1可能通过与Tax相互作用参与调节c-FLIP的表达,从而促进ATL细胞抵抗Fas/FasL介导的细胞凋亡。