微切助互作技术提取王枣子活性成分及药理作用研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zoec
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中草药王枣子自然资源较为丰厚,王枣子全草均可作为药用,具有抑菌消炎,清热解毒等多种作用。王枣子中成分复杂,自受关注以来对其开发研究进程缓慢,其化学成分和药理作用研究较为局限。目前文献研究均采用传统加热回流的提取方法提取王枣子中化学成分,此方法不仅提取率低,资源的利用率降低,而且高温加热能够破坏不稳定活性成分结构,使得成分的活性降低。本研究通过微切助互作技术结合超声提取技术提取王枣子根中生物活性成分,提出安全高效,绿色环保的天然产物提取技术,并探究王枣子化学成分的抗癌活性及其初步作用机制。本研究用微切助互作技术提取王枣子乙素,首先采用单因素实验考察乙醇浓度,提取温度,提取时间和提取次数对王枣子乙素得率的影响;进一步利用正交优化实验选取最优提取条件。正交实验优化得出最佳条件:在80%的乙醇,55℃条件下,连续提取4次,每次提取30 min,得到王枣子乙素得率最大。按照控制变量的方法进行实验,筛选出最佳助剂种类和使用量,分别选择Na2CO3,NaHCO3和β-环糊精作为提取助剂与王枣子根共同研磨,助剂筛选实验得到Na2CO3做助剂时,王枣子乙素得率最高。助剂用量优化实验结果表明,Na2CO3助剂用量3.0%(w/w)时达到最佳提取效果,平均最大得率为4.99%,比浸泡提取得率提高了1.39%,提取时间由24 h缩短到1.5 h。本研究采用硅胶柱层析,薄层层析,重结晶等多种方法分离纯化提取物中的化学成分,确定化合物王枣子乙素和内折香茶菜苷A,首次从王枣子中分离得到内折香茶菜苷A。研究通过MTT法,乳酸脱氢酶细胞毒检测和活性氧检测实验研究王枣子根中化学成分的抗癌活性。浸泡,超声,微切助法得到的三种提取物(20μg/mL)分别作用HepG2细胞24h后,微切助法提取得到提取物生物活性最好;分离出的王枣子乙素和内折香茶菜苷A对HepG2具有较强的抑制作用,对HepG2细胞IC50值分别为7.09±0.21μmol/L和5.04±0.32μmol/L。微切助互作技术结合超声波技术提取成功应用于王枣子根活性成分的提取,显著降低了提取时间,提高了药材的利用率并且提高了生物活性物质的提取效率,是一种绿色高效的中药成分提取技术,有望用于大规模工业化生产;本研究首次从王枣子中分离出内折香茶菜苷A,初步研究了王枣子中化学成分的抗癌活性,为中药绿色提取技术的成功应用以及香茶菜属生物活性物质多样性和抗癌新药的深入研究奠定理论基础。
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