论文部分内容阅读
细胞衰老是细胞永久失去增殖能力过程,通常被认为是抑制有恶性转化倾向的细胞向肿瘤细胞发展的屏障。然而,越来越多的证据表明,衰老细胞可以通过多种途经引发不良效应。电离辐射,尤其在大剂量下,导致肿瘤细胞发生严重DNA损伤;无法修复的DNA损伤持续激活损伤应激信号通路而诱导肿瘤细胞发生衰老。衰老的肿瘤细胞能够发生免疫逃逸并持续存活而留下转移或复发的隐患,因此,探寻减少电离辐射引起衰老细胞的方法对提高放疗病人的预后具有重要意义。目前,研究人员已经提出一种通过放化疗引发肿瘤细胞衰老并进一步诱导其凋亡的两步法治疗策略。已知消除衰老细胞影响的策略包括:选择性杀死衰老细胞的药物(senolytics)诱导衰老细胞死亡、对抗衰老相关的分泌表型效应以及重塑免疫系统清除衰老细胞等。槲皮素是一种来源于食物和多种植物的天然小分子。近期研究发现槲皮素具有促进清除机体衰老细胞的作用。然而,槲皮素是否具有清除衰老肿瘤细胞尤其是电离辐射处理引发的衰老肿瘤细胞作用还未有报道。本研究以黑色素瘤92-1和A375细胞为研究对象,采用10Gy的X射线及碳离子束辐照细胞,研究了槲皮素对电离辐射后衰老黑色素瘤细胞的作用效果。取得的结果归纳如下:(1)大剂量电离辐射诱导92-1和A375细胞发生衰老:经10Gy的X射线或碳离子辐照后,92-1和A375细胞形态变大变扁平、细胞核中存在长时间无法修复的DNA损伤、发生长期细胞周期阻滞且细胞中衰老相关β半乳糖苷酶活性显著升高,表明电离辐射引起92-1及A375细胞发生衰老。(2)槲皮素可诱导经10Gy电离辐射处理的92-1细胞发生明显凋亡,且促凋亡可能通过抑制辐照后上调表达的survivin及Cyclin D1的表达发挥作用:首先采用CCK8细胞增殖检测槲皮素对细胞活力的影响,筛选并获得50μM为最佳处理浓度。接着,用槲皮素处理辐照后还未进入衰老或已经发生明显衰老的92-1细胞,能使细胞出现明显的凋亡形态特征,并激活细胞内凋亡蛋白Cleaved Caspase-3的表达,说明槲皮素能通过诱导细胞凋亡减少衰老细胞的产生,降低辐照后衰老细胞的存活比例。最后,对槲皮素可能的作用通路进行了探讨,发现槲皮素处理改变了电离辐射引起的细胞周期阻滞,降低了衰老的92-1细胞中的周期蛋白Cyclin D1及与存活相关survivin蛋白的表达水平。综上所述,10Gy的X射线及碳离子辐照黑色素瘤细胞能引起细胞发生衰老,而槲皮素能够使衰老细胞发生凋亡,在减少因大剂量照射导致的衰老细胞引发的隐患方面具有很大的潜力。