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随着当今世界人口老龄化的加速，老年痴呆已成为全球性的重大公共健康问题，严重影响患者的生存质量，增加了家庭和社会的精神和经济负担，大大提高了医疗成本。这为医务工作者和科学研究人员带来了挑战，痴呆的防治工作刻不容缓，早期诊断、及早治疗及寻找新的有效治疗手段显得尤为重要。作为老年痴呆的主要疾病，阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease, AD）是以进行性全面认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变，发病率逐年增长，目前已成为严重威胁人类健康的重大疾病。AD发病后治疗越早，疗效越好。最新的研究证实，在AD中存在细胞周期紊乱，其发生在神经变性的早期，这成为AD研究的新视角，为诊断和治疗提供了新思路。PI3K/Akt-p21/p27-RB通路是参与细胞周期调控特别是G1/S的重要途径，其中细胞周期抑制蛋白p21/p27起了至关重要的作用。细胞周期失调是系统性的，不仅局限于大脑，相关的外周细胞如淋巴细胞和成纤维细胞也有细胞周期的改变。AD患者的淋巴细胞与神经细胞在某些方面存在相同的缺陷，是体外研究AD脑代谢和生化过程的颇有前景的模型。目前有关AD的临床研究多侧重于氧化应激、细胞凋亡等方面，细胞周期及相关研究甚少。由于患者的脑组织不易获得，本实验选取了AD患者外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes，PBLs)作为模型,运用流式细胞术研究AD患者淋巴细胞的细胞周期变化,并用免疫印迹法（Western blotting）对AD患者的外周血淋巴细胞中p21、p27蛋白水平进行测定，为进一步探讨细胞周期紊乱，特别是G1/S检测点功能失调在AD发病机制中的作用提供实验基础资料，并为AD的早期诊断和治疗提供新线索。目的：本实验以AD患者外周血淋巴细胞为模型，观察AD患者淋巴细胞的细胞周期变化，测定细胞周期G1/S期相关因子如p21、p27的表达水平，并根据病情程度不同进一步分组比较。除设立正常对照组外，还分析比较其他神经系统变性病如帕金森病（Parkinson disease,PD）的患者外周血淋巴细胞中p21、p27的水平，从而探索该指标的水平变化是否为AD所特有。从而为AD的诊断特别是早期诊断、治疗提供新方法和可干预靶点。方法：收集散发性阿尔茨海默病患者、帕金森氏病患者和正常对照者各20例，利用简易精神状态量表（MMSE）、临床痴呆量表（CDR）等综合评价认知障碍的程度，完善患者信息、临床特征、病史及神经影像学等资料。采集空腹外周血并立即分离淋巴细胞,用缓冲液清洗和去除杂质后,制备单细胞悬液，固定、碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色后使细胞核发射出荧光,用流式细胞分析仪检测AD患者和正常对照者的淋巴细胞细胞周期分布情况、软件分析其DNA相对含量和细胞增殖能力，并在获得外周血淋巴细胞后，提取新鲜总蛋白，采用Western Blotting技术，检测p21、p27的蛋白表达水平。结果：1阿尔茨海默病患者与正常对照者相比,外周血淋巴细胞的细胞周期分布G1及S期差异有统计学意义，G1期比例下降，S期比例升高，并且淋巴细胞增殖指数和DNA相对含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。G2期无统计学意义(P>0.05)。2AD患者外周血淋巴细胞中p21、p27水平均较正常对照组及PD组下降，P<0.05，有统计学意义。PD组与正常对照组相比，外周血淋巴细胞中p21、p27水平无统计学差异(P>0.05)。(p21/gapdh HC0.942±0.177,AD0.564±0.273,PD0.805±0.205,其中AD vs HC,P<0.05；AD vs PD，P<0.05；PD vs HC，P>0.05)(p27/gapdh HC0.974±0.334，AD0.458±0.204，PD0.781±0.287,其中AD vs HC,P<0.05；AD vs PD，P<0.05；PD vs HC，P>0.05)。3外周血淋巴细胞中p21、p27水平与年龄、MMSE评分、CDR评分等均无相关性(P>0.05)。4病情程度不同的AD组别之间比较，p21、p27水平无统计学差异(P>0.05)。结论：在阿尔茨海默病患者的外周淋巴细胞，可能存在与中枢神经元相似的细胞周期改变，细胞周期重启，导致分化，进而引起神经元缺失。我们应用流式细胞术检测细胞周期的变化，发现AD的细胞周期未被阻滞于Gl期，S期比例明显升高，并且经软件分析, AD显示了增强的淋巴细胞增殖能力，有可能为AD的诊断和治疗提供新思路。此外，轻重度AD组之间，细胞周期分布及淋巴细胞增殖能力没有统计学差异，提示细胞周期紊乱可能在AD的早期就已经存在，与病情进展无关。PI3K/Akt-p21/p27-RB通路中的细胞周期抑制蛋白p21、p27，是细胞周期进程中的重要分子，参与细胞的生长、分化、衰老及死亡过程，能够与cyclin/cdk形成复合物使细胞周期停滞在G1期。本实验发现AD的细胞内p21、p27蛋白较PD患者和正常老年人均出现不同程度的下降，与细胞周期检测结果相呼应。这可能成为AD发病的外周血标志物，并区别于其他神经系统变性疾病。但这两种蛋白表达水平均与MMSE、CDR评分没有相关性，并且病情程度不同的患者间无显著性差异，因此尚不能作为病情进展的监测指标。