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目的:检测氯乙烯对大鼠DNA损伤作用,测定大鼠的全基因组DNA甲基化水平,检测癌基因KRAS,损伤修复基因CDKN2A、RASSF1A,DNA烷化损伤修复基因MGMT,抑癌基因SYK基因启动子区甲基化水平及mRNA的表达量改变,探讨氯乙烯致癌在遗传机制和表观遗传机制的关系。方法:选取96只健康大鼠,按体重随机分成4组,每组24只,分别为阴性对照组和低剂量(5mg/kg)、中剂量(25mg/kg)、高剂量(125mg/kg)三个氯乙烯染毒剂量组;腹腔注射,隔日染毒,每周三次。每组大鼠分别于6、8、12周随机处死8只,取其肝脏,应用彗星实验评价肝细胞DNA损伤水平,DNA甲基化定量检测试剂盒(比色法)检测大鼠肝细胞全基因组甲基化水平,选用甲基化特异性PCR(QMSP)和实时荧光定量PCR(QPCR)分别检测上述基因启动子区甲基化水平及mRNA的表达量。采用SPSS22.0对实验数据进行统计分析,本次实验数据符合正态或近似正态分布,采用单因素方差分析ANOVA进行组间比较,两两比较采用LSD法;相关性分析采用双变量相关分析,选用Pearson相关系数,显著性水平为α=0.05。结果:1、氯乙烯可诱发大鼠肝脏组织肝细胞坏死,肝脂肪变性,肝硬化等组织病理变化,大鼠肝细胞DNA损伤水平随着染毒剂量的增加和染毒时间的延长而升高,肝细胞全基因组甲基化水平在染毒组中明显均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2、大鼠肝细胞5种基因启动子区甲基化水平的改变:2.1各组别之间比较:氯乙烯染毒6周时,各染毒组大鼠肝细胞MGMT基因启动子区甲基化水平均高于对照组(P<0.05),mRNA的表达量随着剂量的增加而升高;染毒8周时,染毒组KRAS、SYK甲基化水平随着染毒剂量的增加而下降,SYK mRNA的表达量随着染毒剂量的增加而升高;染毒12周时,RASSF1A、MGMT甲基化水平随着染毒剂量的增加而明显升高,RASSF1A mRNA表达量随着染毒剂量的增加而下降。2.2各染毒时间之间比较:对照组中,KRAS、CDKN2A、RASSF1A、MGMT、SYK基因启动子区甲基化水平及mRNA表达量在各染毒时间差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组中,MGMT、SYK甲基化水平随着染毒时间的延长而下降,MGMT mRNA表达量随着染毒时间的延长而升高;中剂量组中,KRAS、MGMT、SYK甲基化水平在8周和12周时低于6周(P<0.05),mRNA表达量随着染毒时间的延长而升高;高剂量组中,CDKN2A、RASSF1A基因甲基化水平在6周和8周时低于12周(P<0.05),RASSF1A mRNA表达量在6周和8周明显高于12周(P<0.05)。3、大鼠肝细胞DNA损伤和相关基因甲基化相关性分析:大鼠肝细胞DNA损伤与RASSF1A、MGMT基因启动子区甲基化水平呈正相关关系(P<0.05)。结论:1、氯乙烯可引起大鼠肝细胞DNA损伤增加,全基因组甲基化水平升高。2、氯乙烯可引起KRAS和SYK基因启动子区甲基化水平的下降,CDKN2A、MGMT甲基化水平的升高。在短期、低剂量下,氯乙烯可引起RASSF1A启动子区甲基化水平下降,mRNA表达量增加;但当染毒时间延长,染毒剂量增加时,RASS1A启动子区甲基化水平升高,mRNA表达量下降。3、氯乙烯引起RASSF1A、MGMT基因启动子区甲基化水平的升高可能影响大鼠肝细胞DNA损伤的修复,使大鼠肝细胞DNA损伤增加。