论文部分内容阅读
从江苏、山东等地疑似禽大肠杆菌病病例分离鉴定出240株大肠杆菌,通过玻板凝集和试管凝集试验,除52株未能定型外,共鉴定出188个分离株的O血清型。这些定型株共覆盖了39个O血清型,优势血清型分别为：O24、O78、088、065、086,共拥有122个分离株,占本次定型菌株的64.89%(122/188),为本次禽致病性大肠杆菌的主要血清型。结果发现禽源大肠杆菌的血清型变得日益复杂,在种类增加的基础上,与地区亦有很大相关性：不同地区来源的菌株优势血清型不同,南通分离株优势血清型为O24、O86、O22、O88、O91；常州菌株优势血清型为O24、O78、O88、065:泰州菌株优势血清型为O24、O78、O65；胶东地区优势血清型为O24、O13。本研究数据采集于2011—2014年,无论江苏还是山东地区,O24分离菌数量最多,属于优势血清型,而且挑选的8株O24分离菌均具有中高致病性,该血清型在以往很少报道,应该引起足够的重视。取来自不同地区的优势血清型分离株49株,以每株107菌落形成单位(colony forming units, CFU)细菌气囊内接种1日龄无特定病原体鸡6羽,根据接种后7天内发生死亡和病变鸡的比例,确定出高致病株、中度致病株和低致病株分别为61.22%,18.37%,20.41%。受试的16个优势血清型分离株中,对1日龄雏鸡高度致病者占68.75%,中度致病者占25%,低致病者占6.25%。表明我们所分离到的大部分优势血清型分离株均有致病性,且其中93.75%以上分离株属高、中度致病株；而其余33个非优势血清型分离株对1日龄雏鸡具有高、中度致病性者则达到70%以上。据此我们认为,我们搜集到的分离株均具不同程度的致病性,近80%的分离株具高、中度致病性。本研究选取了15种抗生素对154株禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC)分离株进行药物敏感性的检测。154株APEC分离株对12种抗生素(氨苄青霉素、四环素、强力霉素、先锋Ⅳ、磺胺异噁唑、链霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素、左旋氧氟沙星、氟苯尼考、新霉素)的耐药率超过了50%,特别是对氨苄青霉素、四环素、强力霉素、先锋Ⅳ、磺胺异噁唑的耐药率均达到了80%以上。南通、常州、泰州三个地区的多重耐药率高达100%,10重以及10重以上耐药菌株达69.48%(107/154),耐药性情况严重。结果提示,在禽大肠杆菌病或是其他细菌病的防治中要合理使用抗菌药物,尽量减小耐药性带来的负面影响。按种系发生型将大肠杆菌分为A、B1、B2和D4个类型。本次分离的240个APEC分离株中,80株(33.33%)属于D型,39株(16.25%)属于B2型,62株(25.84%)属于A型,其余59株(24.58%)为B1型。B2型和D型占到分离株数的49.58%。本研究对167个APEC分离株的32个毒力基因进行检测。在铁相关基因中,编码介导铁摄取的feoB基因检出率最高,为97.60%；与铁转运相关的sit操纵子基因sitA检出率为次之,为95.81%。50%以上的分离株携带Iss、iroN、traT, iucC、iucD、iutA、fimH中的一种以上的基因。papA、papC、papG allele I、papG allele Ⅲ、 fela、sfa、sfaS、afa、ibeA、cdtB、ace26这些基因的检测率较低,不足10%。高致病株比低致病株出现频率高(P<0.05)的有iucC, iucD、iutA、tsh、iroN、irp-2、iss和cvaC这8个毒力相关因子。据此,我们建立了APEC致病性的初步认定方法：iutA、iss、tsh、iroN、irp-2、cvaC等6个基因中,如果分离株的上述毒力基因数不小于2个,即有89.74%的概率认定该分离株具有致病性,误差率为7.90%。这一认定方法的应用,将有助于减少致病性试验中的动物用量,改善动物福利。