目的 自然流产是生育年龄妇女最常见的疾患之一，生育年龄的妇女，15～20％的临床妊娠以自然流产为结局。其病因十分复杂，并涉及多种因素。目前所掌握的病因有胚胎染色体的异常、母体生殖道解剖异常、内分泌异常、免疫紊乱、凝血功能异常、代谢异常、感染等。近年来研究发现，除胚胎核型异常外，胎盘动脉栓塞所致的胚胎血供不足、绒毛坏死也是自然流产发生的重要原因。但即使经过详细严格的病因筛查，仍有40～60％的自然流产病因不明，这使临床上自然流产的有效治疗受到限制，也给临床遗传咨询医生指导患者再次妊娠带来困难，使自然流产发病机制的研究成为优生遗传和辅助生育技术中的热点之一。多年前，由于检测条件的限制以及人类基因组的复杂性和多样性，人们主要研究流产组织的核型。近年来，随着分子细胞遗传学的进步和人类基因组工程的完成，对流产组织的分析逐渐进入分子水平。从基因水平上研究发病机制的报道逐渐增多。研究表明，绒毛组织的免疫相关基因群、血管发生相关基因群、凋亡相关基因群和其他一些未确定的基因与自然流产有关。但是，至今未确定某个基因在自然流产的胚胎停育中有致死突变作用。 妊娠早期，尤其孕8周前，胚胎相对处于低氧环境。因此，任何原因的波动造成氧供不足，都可能会加重胚胎缺氧，影响胚胎发育，导致自然流产。目前已知的某些自然流产发病相关因素或因子如抗磷脂抗体或许是通过影响胚胎氧供和营养导致胚胎停育的。然而造血功能的下降，尤其胚胎血红蛋白合成的异常，更能直接影响胚胎的血供及营养。由此，我们有理由考虑胚胎造血系统，尤其是胚胎血红蛋白与自然流产的发生可能有关，并可以推测胚胎血红蛋白基因突变和缺失可能是自然流产的原因之一。国际上一些研究已经揭示了这个可能性，但都没有明确提出胚胎血液系统的异常可能导致自然流产。胚胎和胎儿发育过程中，存在着几种不同的特殊的血红蛋白。ε链是胚胎发育上最早出现的珠蛋白链之一，也是构成胚胎血红蛋白的重要珠蛋白链，由胚胎的卵黄囊产生，构成早期具有携氧功能的胚胎的血红蛋白：GowerI(ζ2eε2)， GowerⅡ(α2ε2)。本研究通过检测自然流产绒毛胚胎血红蛋白ε-珠蛋白基因有无突变，探索胚胎血红蛋白ε-珠蛋白基因突变与流产之间的关系，以进一步了解其发病机制。这样对人类研究胚胎血红蛋白基因结构的突变提供一个广阔的空间，将使人们对自然流产的病人的基因诊断药盒的开发提供理论依据，更为流产病人的植入前诊断及基因治疗开辟一个新天地。 资料与方法 1、研究对象： 选中山大学附一医院黄埔院区妇科门诊2006年4月至2006年12月35例在我院行人流清宫术的妇女。无菌收集人流清宫后的绒毛组织50～100mg，-80℃保存。 其中，研究组为20例自然流产妇女，自然受孕，平素月经周期规则，末次月经记忆准确，有或无自然流产病史。B超检查证实宫内妊娠、胚胎停育。B超提示胚胎停育时的孕周为孕6周～8周。 对照组为15例要求行人工流产术的正常妊娠妇女，至少有一次成功妊娠史，既往无自然流产史，人流前无先兆流产。自然受孕，平素月经周期规则，末次月经记忆准确， B超证实宫内胚胎存活，孕周为孕6周～8周。 2、实验方法 用试剂盒提取基因组DNA，应用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)从基因组DNA中分别特异扩增胚胎血红蛋白ε-珠蛋白基因编码区和调控区的基因片段。扩增产物经分离纯化后用遗传分析仪进行基因直接测序，进入互联网在Genebank中查找正常基因序列并与所测结果进行比较，分析测序结果。结果应用PCR技术以及基因直接测序法，除了E4片段无法扩增和内含子2部分的562bp之外，检测了几乎整个胚胎血红蛋白￡一珠蛋白基因的碱基序列。测序结果经互联网Genebank比对，发现在自然流产患者标本的E2片段存在一个错义突变和5’端调控区两个新的多态性位点。 结论 1、流产胚胎的绒毛组织可以检测出胚胎血红蛋白ε-珠蛋白基因，通过这种研究方法能比较真实反应胚胎组织遗传物质的状态。 2、PCR及基因测序技术是检测自然流产ε基因突变最准确的方法。 3、检测到1个新的可能的致病突变位点及2个新的多态性位点。自然流产患者的胚胎血红蛋白ε-珠蛋白基因可能存在致病突变。