【摘 要】
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该文对L-丝氨酸的制备方法进行了综述,通过比较分析认为,以丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)为催化剂进行酶法合成是最具发展前景的工艺路线.酶法制备L-丝氨酸的关键在于获取高效转
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该文对L-丝氨酸的制备方法进行了综述,通过比较分析认为,以丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)为催化剂进行酶法合成是最具发展前景的工艺路线.酶法制备L-丝氨酸的关键在于获取高效转化酶,该论文首先从大肠杆菌K12中提取DNA,并利用设计的引物进行PCR反应,并将编码SHMT基因克隆到载体pMD-18T上进行测序,以证实其序列的正确性,然后将目的基因克隆到表达载体pET-11c上,构建重组质粒pET-11c-SHMT,转入大肠杆菌TOP10F,以获取高产SHMT的构建菌.采用大肠杆菌K12为标准菌株来获取SHMT目的基因,根据载体上的酶切位点设计引物,利用设计的引物和提取的目的基因进行体外扩增(PCR)反应,并将PCR产物纯化后克隆到pMD18-T载体上,再将该质粒转入大肠杆菌JM109中,筛选重组子、鉴定转化子,并进行测序.将目的基因克隆到所选的表达载体pET-11c上,转化到大肠杆菌TOP10F中,筛选重组子、鉴定转化子、构建重组质粒,得到含编码SHMT基因的构建菌.对重组子用IPTG进行诱导表达,利用SDS-PAGE电泳进行鉴定有无目标产物的表达.
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