除虫链霉菌理性选育和发酵条件优化研究

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阿维菌素是由除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)产生的一类十六元大环内酯类抗生素,是一种高效、低毒、有着良好市场应用前景的生物农药。 以S.avermitilisAV-NO.23作为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并通过L-Ile分离培养基进行定向筛选,得到阿维菌素高产菌株AV60s-1,其摇瓶复筛效价为4856μg/mL,比出发菌株提高了42%以上;在150t工业规模实验罐中验证效价为4404μg/mL,比现有生产菌株提高了20%以上,同时其遗传稳定型也优于出发菌株。这说明UV诱变与L-Ile定向筛选这种理性选育方法是获得除虫链霉菌高产突变株的有效途径之一。同时,本文从全程还原糖浓度高达5%左右的的50L罐阿维菌素发酵200h发酵液中分离并经过高葡萄糖浓度耐受驯化,选育到一株耐高还原糖浓度的阿维菌素菌株HG2-11,在2t中试发酵罐分批补糖发酵中验证效价达到4600μg/mL以上,较原菌株阿维菌素效价提高了15%以上,有望应用于工业化大生产。 在摇瓶和发酵罐中对除虫链霉菌的孢子接种工艺进行了研究,同时比较了孢子接种、常规的挖块接种和菌丝接种等三种不同种子接种方式对除虫链霉菌菌体生长和细胞代谢的影响。实验结果表明,孢子接种方式在摇瓶和2t中试发酵罐中均表现出明显优势,在摇瓶发酵中采用孢子接种方式发酵单位比常规的挖块接种方式提高10%左右,比菌丝接种方式提高了20%以上;在2t中试发酵罐中采用孢子接种比常规的菌丝接种发酵单位提高8.5%左右。而150t发酵罐中的孢子接种放大实验表明,不同种子接种方式对阿维菌素发酵并无明显影响。 此外,在现有的工业培养基配方基础上,采用单因子试验、正交设计以及均匀设计等试验方法分析各种营养成分及其配比对阿维菌素合成的影响,对金属离子、无机盐、碳源、氮源等因素进行了较系统的优化。实验结果表明A2+和Co2+浓度分别为0.012%和0.020%,酵母粉和花生饼粉配比分别为2.76%和1.08%时,除虫链霉菌阿维菌素效价最高,摇瓶验证效价为4513μg/mL,较原培养基配方提高了12.5%。
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