论文部分内容阅读
目的 癌的发生涉及癌基因和抑癌基因这两类基因中的多个基因的变化,经过相应的多阶段发展而形成其恶性表型过程。癌基因激活促使细胞恶性转化,引起癌的发生;抑癌基因的缺失将导致细胞失控性生长和分化,促使细胞恶性增殖。已有的研究表明,造血器官的恶性疾病如慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)和Ph1(Philadelphia)染色体阳性的急性白血病等与c-abl基因、ras基因、c-myc基因等癌基因和P53基因、RB基因等抑癌基因有关。为了研究癌基因和抑癌基因在白血病及NB等实体瘤发生过程中的作用,我们将P230Bcr/AblTg/-鼠和DCC杂合性缺失(DCC+/-)鼠交配,产生P230Bcr/AblTg/-鼠、DCC+/-鼠、Bcr/AblTg/-xDCC+/-鼠、Bcr/Abl-/-x DCC+/+正常鼠,并利用它们研究其发生白血病的表型和分子生物学行为,探讨白血病及NB等实体瘤发生的机制。 材料和方法 一、材料 1.小鼠:将P230Bcr/AblTg/-鼠和DCC杂合性缺失(DCC+/-)鼠交配,产生P230Bcr/AblTg/-鼠、DCC+/-鼠、Bcr/AblTg/-x DCC+/-鼠、Bcr/Abl-/-x DCC+/+正常鼠。 2.主要试剂:血液稀释液、溶血液、Bcr/Abl(P230)和内参GAPDH基因引物及探针、DCC基因引物、RNA提取液、cDNA合成试剂盒,乙酸钠-柠檬酸缓冲液(pH:4.3)为流动相。 3.主要仪器:LC-152动物用全自动血细胞计数仪(日本),PCR扩增仪(美国),GeneAmp 5700连续检测系统(GeneAmp 5700 Sequence De-tection System)(美国),分析软件Applied Biosystems公司(日本)提供,紫外分光光度计(Schimadzu UV-1201日本),HPLC(采用Resolve C18柱,464电化学检测器)检测仪。日立7100全自动生化分析仪。 二、方法 小鼠从生后第5个月开始,每隔一个月检测一次外周血白细胞(WBC),血小板(PLT),红细胞(RBC),血红蛋白(HB)及外周血涂片中性粒细胞的百分数。光学显微镜下观察各脏器的病理组织学变化和计数脾脏所有的巨核细胞总数。RT一PCR技术检测夕30BCr/A五l转染基因表达。HrLC检测血VMA/cr;HV灯cr含量。结果 1.解30氏r/Abl军一转基因鼠经过17个月的连续观察,生后13个月出现了增殖性骨髓像以及血小板显著增多,白细胞轻度增加,中性分叶核比值增加,轻度贫血。脾脏中性分叶核浸润,其它组织、器官未见异常改变。 2.DCC+/一模型鼠生后13个月出现血小板显著增加,轻度贫血,中性分叶核比值增加,白细胞正常。脾脏肿大,巨核细胞、中性分叶核浸润,其它如肝、结直肠、肾上腺等组织、器官未见异常改变。血明如灯公;HV灯Cr含量检测。 3.P230Bc扩Abl丫一x DCc+/一鼠生后11个月开始,丑C、中性分叶核比值、PLT均显著增多,轻度贫血。脾脏肿大,巨核细胞、中性分叶核浸润,其它组织、器官未见异常改变。 4.户30 Bcr/‘Abl丫一转基因小鼠被转染基因骨盆呈高表达,其次为脾脏、肝.而P230Bcr/A五l丫一x DCC+/一鼠被转染P23o扫七r/Abl军一基因脾脏呈高表达,其次为骨健、肝。结论 1.P230Bcr/Abl丫一鼠、DCC+/一鼠、P230Bcr/A五l布一x DCC+/一鼠均发展为MPD,且P23oBcr/A五l丫一x DcC+/一鼠比凡知妇七“Ab篆丫一鼠、DCC+/一鼠早2个月发病。DCC+/一鼠未见急性白血病,神经母细抱瘤,结直肠癌等肿瘤发生。 2.(解30)氏r/Abl转基因小鼠的遗传背景及表型可成为体内研究慢性粒细胞白血病及急变机制以及包括免疫治疗在内的八,染色体阳性的白血病治疗新药特药开发的生物学模型 3 Bcr/Abl癌基因激活和DCC抑癌基因的缺失共同作用加速造血细胞恶性转化,进而证明了DCC基因作为一种抑癌基因在癌变过程中有促进作用。