目的:以人乳腺癌细胞株MCF-7作为亲本细胞,采用siRNA干扰技术构建不同雌激素受体(ER)亚型ERα/ERβ的稳定表达株,探讨不同ER亚型对MCF-7的生物学特征及其分泌Th1/Th2类细胞因子的影响。方法:本实验以ERα和ERβ稳定表达的人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞株。以pGenesil-1质粒为载体,将针对ERα或ERβ的siRNA经脂质体转染导入MCF-7,沉默ERα或ERβ基因,建立不同ER亚型的稳定表达株,并命名为:M/HK(ERαhigh/ERβhigh,阴性对照)、M/siα(ERαlow/ERβhigh)及 M/siβ(ERαhi/ERβlow)。以此为基础,做如下实验:1.采用Western blot技术检测细胞的转染效果。2.采用MTT法检测细胞增殖情况。3.采用流式细胞术检测细胞周期分布情况。4.利用二步法RT-PCR检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl和XIAP的表达情况。5.采用双层软琼脂集落形成实验检测细胞体外成瘤能力。6.采用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力。7.采用双抗体夹心ELISA法检测IFN-γ和IL-4的分泌情况。结果:1.Western blot检测结果显示,M/siα和M/siβ细胞ERα或ERβ的最高干扰效率为77.7%和68.3%,而M/HK细胞ER表达水平没有变化。说明成功构建了ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌细胞株。2.MTT 分析结果显示,经 24h、48 h培养,M/siα 细胞(0.55±0.008,0.60±0.008)和 M/siβ 细胞(0.58±0.008,0.69±0.001)的增殖活性与 M/HK 细胞(0.56±0.004,0.63±0.002)相比无显著差异(P>0.05);经72h、96h培养,M/siα细胞(0.71±0.098,0.81±0.087)的增殖活性与 M/HK 细胞(0.88±0.145,1.07±0.156)相比降低(P<0.01),M/siβ细胞(1.01±0.086,1.23±0.124)的增殖活性增强(P<0.01)。3.流式检测结果显示,与M/HK细胞相比,M/siα细胞G0～G1期细胞比例增多(52.75±3.43%vs 65.25±2.08%,P=0.015),S 期所占比例显著减少(31.04±1.39%vs 15.90±1.52%,P<0.01),G2～M 期所占比例无显著变化(16.21±2.64%vs18.86±1.20%,P>0.05);而 M/siβ 细胞 G0～G1 期比例降低(52.75±3.43%vs40.56±6.67%,P=0.017),S 期所占比例升高(31.04±1.39%vs43.16±4.67%,P<0.01),G2～M期所占比例无显著变化(16.21 ±2.64%vs 16.28±2.00%,P>0.05)。4.半定量RT-PCR结果显示,M/siα细胞凋亡抑制基因XIAP的表达水平降低,为M/HK细胞的0.43倍(P<0.01);M/siβ细胞凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl及XIAP的水平升高,为M/HK细胞的1.28倍、1.61倍及1.65倍(P<0.01)。5.双层软琼脂集落形成实验结果显示,与M/HK细胞相比,M/siα细胞的集落形成数目减少(50,13±3.78 vs 21.25±2.63,P<0.01),为 M/HK细胞的 0.43倍;M/siβ 细胞的集落形成数目增多(50.13±3.78vs 67.85±7.32,P<0.01),为M/HK细胞的1.36倍。6.细胞黏附实验结果显示,读取各组细胞570nm处的吸光度(4)值,与M/HK细胞相比,]M/siα细胞的体外黏附能力下降(0.70±0.08 vs0.48±0.09,P<0.01);M/siβ细胞的体外黏附能力无显著变化(0.70±0.08vs0.65±0.12,P>0.05)。7.ELISA结果显示,与M/HK细胞相比,M/siα细胞IFN-γ的分泌水平增强(54±2 pg/mL vs 10.2±8 pg/mL,P<0.01),M/siβ 细胞降低(54±2 pg/mL vs15±1 pg/mL P<0.01);各细胞IL-4的分泌水平没有明显变化(M/HK 38±4pg/mL,M/siα42±8pg/mL,M/siβ44±7pg/mL,P>0.05)。结论:1.ERαERβ不同表达会影响MCF-7的生物学特性。ERα过表达可促进MCF-7的生长、侵袭和转移;而ERβ过表达则可抑制细胞的生长。对ERα/ERβ表达状态进行调控可能会是一种新型的乳腺癌治疗策略。2.ERα/ERβ不同表达可调节MCF-7的Th1类细胞因子IFN-γ的分泌水平,但不影响Th2类细胞因子IL-4的分泌,因此ERα/ERβ表达状态可能会影响乳腺癌微环境的Th1/Th2平衡,间接调节乳腺癌的局部免疫。