研究背景:作为人脑的基本构成部分,神经胶质细胞占了很大比例,胶质瘤在中枢神经系统肿瘤发病率最高。作为人脑最好发的肿瘤,尤其是其WHO分级IV级肿瘤中的胶质母细胞瘤,中位生存期只有15-18月左右,其高发病率、高侵袭性、高致死性及致残性,以及手术切除肿瘤时,对功能保护的要求,对放化疗的耐受,在各级肿瘤研究机构中备受青睐。我们前期阅读大量文献,有前人学者指出Evi1基因在人类白血病中,作为重要的癌基因,能刺激白血病细胞的增殖,在诸如肠癌、卵巢癌、肺癌等实体肿瘤中,对肿瘤细胞的快速恶性生长,最终造成病人的“恶病质”也有相对透彻的研究。侵袭和转移是恶性肿瘤另外一个极其重要的生物学特征,是恶性肿瘤具有高度危害性的原因之一,同时也是临床治疗失败的一个关键性因素。其中目前研究热点基质金属蛋白酶(MMP)尤其是MMP2对肿瘤细胞的侵袭以及突破基底膜浸润生长重要作用。但这些在人类胶质瘤细胞中,研究不多,故此项研究在胶质瘤组织以及细胞株中研究有重要意义。本次实验中我们首先检测Evi1在胶质瘤组织以及胶质瘤细胞株中的表达,随后进一步验证探索其与人脑胶质瘤的增殖、侵袭的作用及相关机制。主要从分为如下两个部分:第一部分:Evi1基因在人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞株中表达特性的研究目的:通过体外研究Evi1基因在正常人脑组织及人脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞株中的表达情况,来探讨其对胶质瘤细胞的生长发育是否有意义,为进一步研究其在胶质瘤中的功能奠定基础。方法:我们收集苏州大学附属第一医院神经外科近几年来,手术切除的不同级别的胶质瘤标本40例和脑外伤、脑出血以及动脉瘤术中切除7例正常脑组织标本,以及培养的U87/U251细胞株,运用Trizol法提取细胞以及液氮中冷冻保存的标本的总RNA,运用实时定量PCR技术,检测Evi1基因在胶质瘤组织中和细胞株中的表达水平。结果:Evi1基因在不同级别胶质瘤组织中表达存在差异,正常脑组织与高级别胶质瘤组织(III级和IV级)之间存在差异(P<0.05),低级别胶质瘤(II级)与高级别胶质瘤(III和IV级)之间表达存在差异(P<0.05),随着胶质瘤级别的提高,Evi1基因的表达水平越来越高。在胶质瘤细胞株U87/U251中,表达含量较正常脑组织明显上升,有统计学意义(P<0.05)。结论:Evi1基因在胶质瘤组织中呈现高表达,其可能在胶质瘤细胞的生长,增殖,侵袭中发挥着一定的作用,为我们下一步研究其机制提供依据。第二部分Evi1基因对胶质瘤细胞株U87/U251的增殖,侵袭作用的研究目的:研究Evi1基因对胶质瘤细胞株的增殖,侵袭的影响,为胶质瘤治疗提供理论依据。方法:用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000及si RNA瞬时转染胶质瘤细胞株U87/U251,同时设立空白及阴性对照组,用荧光显微镜以及流式细胞仪检测转染效率。并筛选吉玛公司提供的三条干扰链,选择干扰效果最佳的一条链用于后续实验。CCK8检测干扰后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期变化,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,并检测与细胞侵袭有关的基质金属蛋白酶2(MMP2)在转染后较阴性对照组以及空白组的表达含量的变化。结果:U87和U251细胞株转染si RNA后,细胞的增殖,迁移以及以及侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),细胞周期阻滞于G1期,S期细胞减少,并且验证得出转染后,细胞株所表达的基质金属蛋白酶MMP2明显下降(P<0.01)。结论:转染si RNA后,细胞的增殖,迁移,侵袭能力明显下降,细胞周期受阻滞,并且验证得出MMP2表达含量下降,基因通过靶向MMP2,进一步调节细胞的生理活动。