论文部分内容阅读
本论文研究了重组GDF-9对牛卵丘细胞增殖及扩展相关基因表达的影响。研究结果分如下4个部分：1.通过RT-PCR检测体外培养不同成熟时间的牛卵丘卵母细胞复合体中GDF-9的表达情况,同时观察卵丘扩展情况。结果表明在不同的成熟培养时间,GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体中均有表达,且在体外成熟培养12小时表达量成峰值,与卵丘细胞开始扩展的时间一致。2.将卵丘卵母细胞复合体中的卵母细胞进行去除处理,同时加入外源100ng/ml GDF-9以及lOug FSH,观察外源GDF-9和内源的GDF-9对卵母细胞的卵丘细胞复合体在体外培养中扩展的影响。结果表明不论外源GDF-9和内源的GDF-9在卵丘细胞扩展中都起着重要的作用,而且FSH对卵丘细胞的作用也需要GDF-9的协同。3.在牛卵丘细胞体外培养的基础上,研究外源GDF-9和FSH对其生长的影响。结果表明,不论FSH存在与否,GDF-9可以促进牛卵丘细胞增殖,这种促进作用随着浓度的增加而增强。而且在相同GDF-9浓度下,FSH显著促进细胞增殖,表明GDF-9与FSH在一定程度上对卵丘细胞的增殖具有协同作用。采用实时荧光定量PCR技术研究不同浓度下外源重组GDF-9对牛卵丘细胞扩展相关基因(PTX3、HAS2、PTGS2)表达的影响,试验结果表明：扩展相关基因表达对GDF-9浓度具有梯度依赖性,随着GDF-9浓度的增大,扩展相关基因表达也随着增大,表明GDF-9在卵丘细胞扩展中起到一定的作用。4.构建牛GDF-9基因真核表达质粒,在牛卵丘细胞中过表达。利用western-blot检测GDF-9在卵丘细胞中过表达情况,同时通过实时荧光定量PCR技术检测扩展相关基因表达的情况。(1)通过western-blot对牛GDF-9过表达检测结果表明,检测有单一条带,说明GDF-9真核表达质粒构建成功。(2)与对照组相比,过表达GDF-9的牛卵丘细胞中扩展相关基因的表达明显升高。本试验通过对GDF-9在卵丘细胞体外增殖培养中的作用研究,表明GDF-9对卵丘细胞增殖具有重要作用,这一结果对进一步阐明GDF-9调节卵丘细胞功能的分子机制具有重要的意义。