纤维素（cellulose）是植物细胞壁的主要组分之一,是地球上数量最为丰富但又未获得充分利用的可再生资源。所以实现纤维素的降解具有重要的环境、农业和商业意义。丝状真菌绿色木霉以分解纤维素和半纤维素而著称,含有降解纤维素的完整酶系：内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。酵母展示系统具有诸多优点：蛋白质被展示到细胞的表面,所以生物催化过程可以重复进行,并且催化产物易于分离；因为各种各样的蛋白质和多肽都可以被展示到细胞的表面,所以该系统可以用于功能蛋白质的预制备；酵母展示系统能够一系列的不同大小的功能蛋白进行转录后的加工修饰。所以与其他展示系统相比,酵母展示系统具有独特的优势,从而获得了明显的发展。从本实验室保存的能够高效降解纤维素的绿色木霉金1号（Trichoderma viride Gold No.1）菌株出发,提取基因组DNA,经PCR扩增,获得内切葡聚糖酶Ⅲ（eg3）基因,将该基因转化到大肠杆菌中保存。通过测序结合NCBI数据库中的数据,初步判断该基因不含内含子。对内切葡聚糖酶Ⅲ（eg3）基因进行了酿酒酵母异源表达研究。借助酿酒酵母S. cerevisiaeHl58异源表达内切葡聚糖酶Ⅲ（eg3）基因,并对表达产物EGⅢ进行了性质研究。通过刚果红染色定性检测EGⅢ,通过刚果红平板上水解圈可判断真核表达的EGⅢ是有生物学活性的；借助SDS-PAGE测定了EGⅢ的相对分子质量,发现相对分子量为54KDa,这比实验预期略大；通过对该酶的酶学性质研究测定了EGⅢ的最适宜反应温度为55℃、最适宜pH为6.0,测得异源表达EGⅢ的最大酶活为297IU/mL。通过这些基础研究为表面展示EGⅢ打下了坚实的基础。对内切葡聚糖酶Ⅲ（EGⅢ）进行了酿酒酵母表面展示研究。借助酿酒酵母表面展示技术系统S.cerevisiaeEBY100,将EGⅢ展示到酿酒酵母细胞表面,实现了EGⅢ在酿酒酵母细胞表面的固定化,通过刚果红染色的水解圈判断细胞表面展示EGⅢ的活性；通过酶学性质研究测定了表面展示EGⅢ在半乳糖诱导48h酶活最高为257IU/g,的最适宜反应温度为65℃,在65℃分别保温1h和3h,酶活仍分别维持在87%和45%；最适宜pH为7.0,且在pH6.0～8.0之间酶活性较高；研究了金属离子对表面展示EGⅢ的影响,发现Mg2+、Fe2+、Mn2+是激活剂而Cu2+、Fe3+、Co2+和Ag+是抑制剂。