黑穗醋栗（Ribes nigrum L.）是寒地特色小浆果果树树种之一,果实中花色苷含量较高,花色苷具有改善视力、降低血压、减缓炎症、抑制癌细胞等多种保健功能。类黄酮-3’,5’-羟基化酶（F3’5’H）是花色苷合成途径中的关键酶之一,对花翠素（是花色苷的一种）的合成起着至关重要的作用。本论文以东北农业大学园艺试验站黑穗醋栗种植资源圃中的‘布劳德’（Brodforp）为试验材料,在克隆的基础上,实施实时荧光定量PCR技术,分析了黑穗醋栗F3’5’H基因在根、茎、叶、花、芽等不同组织器官以及果实发育的不同时期的表达特性,推测该基因的表达与果中花色苷含量的相关关系,构建了F3’5’H原核表达系统,以期为系统的阐明F3’5’H基因在黑穗醋栗花色苷生物合成中的作用以及表达方式提供理论依据。主要研究结果如下:（1）采用PCR技术成功克隆得到黑穗醋栗类黄酮-3’5’-羟化酶（F3’5’H）基因,开放阅读框（ORF）的长度为1530 bp,编码509个氨基酸。采用生物信息学方法预测黑穗醋栗F3’5’H基因编码的蛋白质相对分子量为57.11 kDa,理论等电点为9.26,为亲水性蛋白,无信号肽,有1个跨膜区域,具有3个CYP450特异保守序列（FGAGRRICAG,PPGP,AGTDT）,属于CYP450家族,与已知的葡萄、拟南芥、野生大豆、仙客来、黑果枸杞、矮牵牛等植物的F3’5’H基因的序列相似性在75%-80%左右,其中同葡萄的亲缘关系最近。（2）在克隆的基础上,用实时荧光定量PCR对黑穗醋栗不同组织器官以及果实发育时期中F3’5’H基因的表达量进行检测和比较,结果显示:从不同组织器官来看,黑穗醋栗F3’5’H基因在花中的表达量最低,主要表达在果皮中,在果实发育第一个时期中的表达量就显著高于其他部位,说明其表达具有组织器官特异性;从果实发育时期来看,F3’5’H基因随着果实的发育其表达量逐渐升高,在果实发育中后期达到最高,随后下降。（3）采用高效液相色谱与质谱联用（HPLC-MS/MS）技术对‘布劳德’黑穗醋栗不同组织部位及果实发育不同时期中花色苷进行定性定量分析。定性分析结果表明:共检测到花色苷17种;定量分析结果表明:花色苷总含量表现为果皮高于其他组织部位,且花色苷总含量随着果实的发育逐渐递增,至果实完全成熟达到最高,含量为37.25 mg/g,根、茎、叶、花、芽等部位花色苷的总含量低于2.00 mg/g;且发现花翠素类花色苷占总花色苷含量的一半以上,其次为花青素类,约占四分之一。（4）对黑穗醋栗F3’5’H基因相对表达量和花色苷总含量进行相关性分析,结果表明二者呈现明显的正相关关系。（5）成功构建了黑穗醋栗F3’5’H基因原核表达载体（pET28b-F3’5’H）,对不同菌株、诱导温度及时间进行优化,结果显示以E.Coil strain No.3为表达菌株,IPTG浓度为1.0 mM,16°C诱导16 h为最佳诱导条件,在57 kD位置成功表达,符合蛋白预期的大小,对目标蛋白纯化发现pET28b-F3’5’H蛋白以包涵体的形式存在,得到浓度为0.41 mg/mL,纯度达60%的特异蛋白,表明为验证黑穗醋栗F3’5’H基因的功能和其编码酶的活性研究提供基础。