论文部分内容阅读
目的:应用白血病细胞体外培养的方法,观察熊果酸(UA)对急性髓系白血病(AML)原代细胞增殖、凋亡及对survivin基因表达的影响,探讨熊果酸抗肿瘤可能的作用机制,为临床提供理论依据。
方法:
1、骨髓单个核细胞(MNC)分离及培养:无菌条件下采集AML患者骨髓液2mL(肝素抗凝),用Ficoll淋巴细胞分离液提取MNC,培养于含10%胎牛血清(FBS)、100IU/ml青霉素、100IU/ml链霉素的RPMI1640培养液中,置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。
2、分为五个组,不加药对照组、10μmol/L UA组、20μmol/L UA组、40μmol/LUA组、80μmol/L UA组,作用时间分为6、12、24、48小时,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度、不同时间点作用后细胞的活力,检测细胞增殖是否受到抑制。
3、用流式细胞仪对20μmol/L UA组、40μmol/L UA组作用24小时的细胞进行凋亡检测,以明确UA对AML原代细胞凋亡的影响。
4、用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)方法检测抑凋亡基因survivin的表达情况,以及40μmol/L UA作用24小时后AML原代细胞survivin的表达水平变化。
结果:
1、MTT结果显示:在不同时间点,与对照组相比,UA能显著抑制AML原代细胞的增殖,呈浓度依赖关系。随作用时间延长,抑制率也逐渐增加,其抑制作用亦呈时间依赖关系。
2、流式细胞仪凋亡分析结果显示:作用24小时后,20μmol/L UA组细胞凋亡率为29.37±17.7%,与对照组(16.00±13.92%)相比无显著差异,40μmol/LUA组凋亡率为49.43±25.56%,与对照组相比差异显著。
3、实时荧光定量PCR检测结果显示:检测AML患者17例,survivin基因阳性表达9例,阳性率52.94%。阳性表达者进一步检测UA对survivin基因表达水平的影响,结果显示40μmol/L UA作用24小时后能下调survivin基因的表达,与对照组相比具有显著差异。
结论:
1、UA能抑制AML原代细胞增殖,促进AML细胞凋亡,并呈浓度-时间依赖关系。
2、UA能下调AML原代细胞表达抑凋亡基因survivin,UA促进凋亡,可能与其下调survivin基因表达有关。