肺癌是美国癌症相关死亡的第一位原因(超过乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌死亡总数)，占癌症总死亡数的28％。由于缺乏有效的早诊早治手段，初诊肺癌患者中约3／4已失去手术机会，其主要治疗手段为化疗和放疗。进入90年代以来，随着第三代药物健择等的出现，肺癌化疗效果有了一定的提高，但这些第三代药物与铂类联合方案的有效率也才达30％—40％，并且这个水平已达到了一个新的平台阶段。研究显示，一些基因的异常或表达水平增高使肿瘤对化疗药物产生抗药性是影响药效的一个重要因素。实时荧光定量PCR技术和基因芯片技术是近年来发展并逐渐完善的一种程序化、规模化、高通量的基因表达分析与基因检测新技术，为现代生物医学等领域内的研究与探索提供了有力的资料获取与分析的技术平台，在基因检测、基因表达分析、突变检测、SNP筛查以及反义药物的筛选等研究领域得到越来越广泛的应用。本文我们应用这两种新技术对RRM1和mdr1基因的单核苷酸多态性及表达进行了检测并分析其相关性，期望对肺癌的个体化治疗提供理论依据。 第一部分：核糖核苷还原酶M1亚单位基因是健择的分子靶点，它是RNA合成的前体，参与核糖核苷酸还原成脱氧核糖核酸的过程，为DNA修复的限速酶；研究表明，RRM1启动子区域(-)37位点基因的多态性与健择的疗效有关。本章建立了一种简便和特异的对RRM1进行等位基因分型的方法。以RRM1基因为靶合成含突变位点的特异引物：野生型引物WF，突变型引物TF和共同的下游引物R。用DNA嵌入荧光染料SYBR Green Ⅰ进行荧光PCR扩增，在PCR后进行溶解曲线分析以确定得到产物的基因型，优化了引物浓度，对其灵敏度进行了分析，对10份PCR产物进行了验证。野生型基因组为模板时，WF和R组合有荧光响应，而TF，R组合无荧光响应；当以突变型基因组为模板时，TF和R组合有荧光响应，而WF和R组合无荧光响应，两者Ct值均为24，Tm值均为89℃。优化引物浓度为0.25μmol／L。PCR产物测序证实荧光PCR法与直接测序结果一致。AA型等位基因的在中国人群中的发生频率为31.3％。该方法能准确快速地区分RRM1的基因型，其敏感性和特异性强。 第二部分：建立了实时荧光定量PCR方法检测健择耐药相关的5种基因