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研究目的(1)探索电针“足三里”穴能否改善脊髓损伤后大鼠肠道传输功能和感觉功能障碍。(2)明确该电针疗法对脊髓损伤大鼠肠道微生态的调节作用。方法选取成年SPF级SD雌性大鼠96只,适应性喂养一周后,采用随机数字表法进行分组,抽取24只大鼠为对照组(sham,n=24),剩余大鼠采用重物坠落法建立重度脊髓损伤模型(SCI,n=72),每日对其进行术后护理及排尿,sham组仅暴露棘突和椎板,不做脊髓损伤处理。所有造模及假手术组大鼠术后均予腹腔注射庆大霉素5000U/kg抗感染。24h后将BBB评分为0分的SCI大鼠随机均分为3组:模型组(M,n=24)、电针组(E,n=24)和菌群移植组(FMT,n=24)。sham组和M组每日固定15min,E组每日电针“足三里”穴15min(疏密波,电流强度1-2m A),采集E组新鲜粪便配置成10%悬液,每日按1ml/100g体重灌胃FMT组。于实验结束(干预14天)后无菌操作收集各组大鼠新鲜粪便,进行菌群16Sr DNA测序和生物信息学分析各组菌群分布情况,记录大鼠24h排便量(湿重、干重和含水量),计算首粒黑便排出时间,行肠道敏感性测试,并取其结肠进行HE染色观察其病理形态学改变。结果1.重度脊髓损伤的大鼠模型建立重物坠落法建立模型72只,术后24h的BBB评分均为0分,较sham组,神情倦态,均伴有尿失禁、尿潴留现象,部分出现脓尿及血尿。表明重度脊髓损伤模型均造模成功。2.电针及菌群移植对肠道传输功能影响在湿重上,sham组与FMT组间无显著差异(p=0.07),FMT组明显多余M组(p=0.046);在含水量上,E组与FMT组均显著大于M组(均为p<0.001);首例黑便时间,E组与FMT组均显著短于M组(均为p<0.001),且E组也显著短于sham组(p=0.011)。3.电针及菌群移植对肠道感觉功能的影响四组间在腹壁撤离反射评分中均无显著差异(均为p>0.05);4.电针及菌群移植对结肠病理改变的影响HE染色后光镜下放大100倍及200倍结果显示,在形态学上,M组腺体排列不规整,肌层变薄并有大量炎性细胞浸润。E组与FMT组类似,均较M组织形态学出现明显改善,腺体排列更规整,数量更多,肌层更厚,仅出现轻度肌层萎缩和少量炎性细胞的浸润。5.电针及菌群移植对菌群改变的影响16Sr DNA的结果显示,各组样本取量足够;使用Shannon指数,Simpson指数,Ace指数和Chao1指数进行各组间肠道菌群各组比较,各组丰度及均匀度方面无明显差别,均P>0.05;但各组间菌落结构组成均具有显著性差异,Beta多样性指数显示,sham组与E组、sham与FMT组组间菌落有显著性差异(P<0.001),M组与E组,M组与FMT组组间菌落有显著性差异(P<0.001),其余各组无明显差异;各组间菌落分布在门、纲、属水平上菌群组成结构上差异性显著:其中电针和菌群干预在门水平可提高黑色素细菌门丰度,降低变形菌门和放线菌门的丰度,在纲水平上可有效减少γ-变形菌纲所占比例,但在属水平上,电针及粪菌移植可能通过进一步调整布劳蒂亚属(Blautia)、杜氏杆菌属(Dubosiella)和杆菌属(Bacteroides)、杆菌属(Bacteroides)、阿克曼属(Akkermansia)及乳酸杆菌属(Lactobacillus)等菌落丰度从而影响肠道功能。结论(1)电针“足三里”穴能够显著的改善脊髓损伤后肠道的运动能力,引发形态学的良性变化,形态学结果与行为学结果具有一致性。(2)电针疗法及其菌群可能通过改变脊髓损伤后肠道菌群的菌落结构组成,从而改善肠道传输功能。