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肿瘤细胞在生长和转移过程中会通过分泌各种血管生成因子促进血管生成,进而促进肿瘤转移。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一种有效的促血管生成因子。目前,针对bFGF为靶点进行肿瘤药物的开发已经成为一个热点。三叶青是我国独有而珍贵的一种中药材,大量研究表明三叶青具有抗肿瘤活性。因此,以bFGF作为靶向分子筛选三叶青中能与bFGF相互作用的亲和因子,以及亲和因子对bFGF活性的影响是本文论文研究的重点。本试验利用bFGF亲和层析柱筛选三叶青中与bFGF特异性结合的有效成分,并进行鉴定。运用亲和层析法、紫外-可见分光光度法、圆二色谱法和非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(Native-PAGE)测定三叶青中bFGF亲和因子与bFGF及其修饰体FGFC的亲和性;同时以小鼠胚胎成纤维细胞Balb/c 3T3和神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y构建模型,采用MTT法和以神经突触生长为评价指标,检测亲和因子对FGFC生物活性的影响;为了提高鉴定得到的三叶青bFGF亲和因子儿茶素的生物利用率及药效,采用酰基化修饰法探讨儿茶素衍生物的合成。结果如下:1.三叶青中bFGF亲和因子筛选结果显示,三叶青中与bFGF特异性结合的有效成分为儿茶素和原花青素B1。2.亲和层析试验结果显示,儿茶素及原花青素B1与FGFC结合,且PBS和甘氨酸中未观察到洗脱物质。紫外-可见分光光度法结果显示,儿茶素与蛋白孵育后,蛋白在204 nm处的肽键吸收峰红移,原花青素B1与蛋白孵育后,蛋白在204 nm处的肽键吸收峰变强,并且红移。圆二色谱法显示,两种物质均加强蛋白CD光谱正峰和负峰的强度。非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示,儿茶素及原花青素B1抑制FGFC的迁移,且具有剂量依赖性。以上结果均显示,儿茶素及原花青素B1可以与FGFC亲和,并且改变了蛋白质的构象。3.Balb/c 3T3细胞模型试验结果显示,1 mg/mL儿茶素对Balb/c 3T3细胞增殖有显著的抑制作用。500μg/mL和1 mg/mL儿茶素、原花青素B1均对25 ng/mL FGFC促细胞增殖活性有显著的抑制作用。当浓度为1 mg/mL时,儿茶素对FGFC的抑制作用最强;当浓度为500μg/mL时,原花青素B1的活性最强。4.SH-SY5Y细胞模型试验结果显示,儿茶素及原花青素B1浓度在50μg/mL以上有细胞毒性,浓度从1μg/mL到50μg/mL均显著抑制FGFC的活性,且具有剂量依赖性。5.儿茶素衍生物合成试验显示,初步合成儿茶素衍生物,证明了酰基化修饰法的可行性。