【摘 要】
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RNA干扰(RNAi)是一种由小干扰RNA(siRNA)介导的靶序列特异性RNA降解机制，现在它不仅被当作一种研究工具，还可以用作一种抑制病毒感染的基因治疗策略。在哺乳动物细胞里，基于
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RNA干扰(RNAi)是一种由小干扰RNA(siRNA)介导的靶序列特异性RNA降解机制，现在它不仅被当作一种研究工具，还可以用作一种抑制病毒感染的基因治疗策略。在哺乳动物细胞里，基于小发夹RNA(shRNA)的RNA干扰技术可以成功下调细胞或者病毒基因的表达。
我们在HeLa，293T以及U373-MAGI-CCR5e细胞中表达靶向细胞内cyclinT1蛋白的shRNA表达质粒后，发现表达质粒CT-4可以特异的下调细胞内cyclinT1蛋白的表达。同时，我们的结果显示cyclinT1蛋白的下调水平跟转染的shRNA表达质粒的剂量以及转染的时间都有一定的正相关性。
CDK9/cyclinT1这一复合物在细胞内的活性不依赖于细胞周期，其作用是参与转录的延伸。这表明作为这个复合物的一个亚单位的cyclinT1对细胞的存活是至关重要的。但是，我们的实验表明在培养的细胞系中，下调cyclinT1蛋白的表达既没有诱导宿主细胞产生凋亡，甚至没有影响细胞周期的变化。我们的结果与刚刚报道的下调P-TEFb的表达没有引起细胞死亡相一致。在细胞水平，cyclinT1将会是一个很好的抑制HIV-1复制的细胞内靶位点。
通过共转染靶向cyclinT1的shRNA表达质粒和HIV-1前病毒质粒，本文发现：下调cyclinT1可以抑制HIV-1前病毒质粒在宿主细胞内的复制。我们用HIV-1单周期病毒感染下调了cyclinT1的U373-MAGI-CCR5e细胞，发现下调cyclinT1可以在病毒感染早期抑制病毒的复制，还可以降低HIV-15LTR启动子的活性。
并且，发现HIV-1在体外培养的细胞中，其复制水平跟宿主细胞内cyclinT1蛋白的量密切相关。本文运用细胞体内表达shRNA将会比合成的siRNA在细胞内维持更久的时间。
实验表明在体外培养的细胞中，cyclinT1可以成为一个抑制HIV-1复制的有效的靶点。并将在原始细胞中，如T淋巴细胞，单核细胞或巨噬细胞，运用可以表达shRNA的慢病毒载体尝试下调cyclinT1，探讨其对原始细胞存活以及HIV-1复制的影响。
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