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研究背景尽管科研人员投入了大量精力及研究经费,卵巢癌仍然是一个非常致命的疾病。到目前为止,尚无早期发现卵巢癌的有效筛查方法,大多数患者被诊断出癌症时已发生转移。目前治疗卵巢癌的主要方法是减瘤根治术及术后铂类和紫杉醇的化疗。较新疗法包括分子靶向治疗和腹膜内化疗可以稍延长生存时间,但大多数患者最终愈后不良。术前就已经转移和术后化疗抵抗及复发是治疗卵巢癌的主要问题。研究卵巢癌化疗抵抗及转移的具体途径和机制对患者意义重大,会使患者的治疗效果得到显著改善。在许多恶性肿瘤中,都存在一个亚群的肿瘤细胞,只占极低比例,但是能决定肿瘤的发生发展,称为肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)。这些CSCs被认为是肿瘤发生、转移及术后化疗抵抗的根本原因。趋化因子结合到相应受体激活下游信号通路后参与肿瘤增殖及转移。最近研究表明,趋化因子可以刺激CSCs上特异受体激活相关通路从而促进其自我更新和侵袭转移。比如表达CXCR1的乳腺癌干细胞与CXCL8结合后维持自我更新和侵袭能力；CD133+CXCR4+CSCs是胰腺癌转移不可或缺的因素；CXCR4+脑胶质瘤干细胞在其配体CXCL12的趋化下启动了胶质瘤的转移。这些研究结果表明,CSCs参与的肿瘤转移部分是通过趋化因子介导,因此CSCs的转移潜能是可能被抑制的。迄今为止,科学家已证明存在CD133+卵巢肿瘤干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs),并分别从病人肿瘤、腹水及细胞株中成功分离出OCSCs。但是何种因子维持OCSCs自我更新及侵袭迁移能力尚未可知,本课题组在前期实验中已从卵巢癌细胞系A2780中成功分离、鉴定出OCSCs,通过PCR-array检测发现,OCSCs相对于CD133-非卵巢癌干细胞(non ovarian cancer stem cells,nOCSCs)高表达趋化因子CXCL16及其受体CXCR6。基于以上研究,我们设想OCSCs可能通过自分泌CXCL16结合到CXCR6维持其生物学行为,本研究将对OCSCs的针对性治疗策略提供理论依据。目的：1.比较CXCL16和CXCR6在CD133+OCSCs和CD133-nOCSCs之间的表达差异2.探讨CXCL16/CXCR6轴在CD133+OCSCs增殖及侵袭迁移中的作用方法：1. Real-time PCR检测OCSCs与nOCSCs中CXCL16及CXCR6在mRNA水平的表达差异。2. ELISA检测OCSCs与nOCSCs中CXCL16在蛋白水平的表达差异。3.流式细胞术检测OCSCs与nOCSCs细胞表面CXCR6的阳性率。4.CCK-8法检测中和抗体阻断CXCL16后OCSCs增殖能力的变化。5. Transwell实验检测中和抗体阻断或shRNA沉默CXCL16后OCSCs侵袭迁移能力的变化。6. Transwell实验检测中和抗体阻断CXCR6后OCSCs侵袭迁移能力的变化。结果：1. OCSCs较nOCSCs高表达CXCL16 mRNA(4.59±0.73)倍,高表达CXCR6 mRNA(18.24±0.77)倍(P<0.01)。2. OCSCs的CXCL16分泌量为(2434.00±204.65) ng/ml,而nOCSCs的CXCL16分泌量为(129.33±31.64) ng/ml, (P<0.01)。3. OCSCs表面CXCR6表达率为(60.6±5.3)%,而nOCSCs只有(6.4±1.6)%,(P<0.01)。4.CCK-8检测结果显示,与对照组相比,当OCSCs分泌的CXCL16被中和抗体阻断后,OD(450)值在96h内无明显差异(P>0.05)。5. CXCL16中和抗体阻断实验：迁移细胞数：对照组为(43.00-±4.00)个／视野,CXCL16中和抗体组为(21.33±3.06)个／视野(P<0.01)。侵袭细胞数：对照组为(44.58±4.51)个／视野,CXCL16中和抗体组为(18.00±4.00)个视野(P<0.01)。CXCL16-shRNA沉默实验：迁移细胞数：对照shRNA组为(59.33±2.52)个/视野,CXCL16-shRNA组为(28.00±3.00)个/视野,(P<0.01)。侵袭细胞数：对照shRNA组为(63,67±3.51)个/视野,CXCL16-shRNA组为(28.67±4.04)个/视野,(P<0.01)。6. CXCR6中和抗体阻断实验：迁移细胞数：对照组为(64.67±4.16)个/视野,CXCR6中和抗体组为(33.17±5.03)个/视野,(P<0.01)。侵袭细胞数：对照组为(55.67±3.51)个/视野,CXCR6中和抗体组为(24.33±4.04)个/视野,(P<0.01)。结论：1.相对于nOCSCs, OCSCs在基因水平和蛋白水平都高表达CXCL16及CXCR6。2.趋化因子CXCL16不影响OCSCs的增殖能力。3.CD133+卵巢癌干细胞自分泌CXCL16结合CXCR6后维持其侵袭迁移能力。