【摘 要】
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双链RNA病毒感染生殖道后,通过干扰卵巢功能和妊娠过程,从而影响雌性动物生殖潜能。然而病毒感染是否会直接影响早期胚胎发育过程仍有待深入探讨。本研究旨在利用双链RNA病毒病原相关分子模式物Poly（I:C）模拟病毒感染小鼠卵母细胞体外受精过程,探究病毒感染影响体外受精和早期胚胎发育的潜在作用机制。试验中,首先小鼠MII期卵母细胞随机分为6个组,分别用0,0.001,0.01,0.1,1,10μg/m
【基金项目】
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国家重点研发项目（2021YFD1200403）； 四川省科技计划国际合作项目（2020YFH0149）；
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双链RNA病毒感染生殖道后,通过干扰卵巢功能和妊娠过程,从而影响雌性动物生殖潜能。然而病毒感染是否会直接影响早期胚胎发育过程仍有待深入探讨。本研究旨在利用双链RNA病毒病原相关分子模式物Poly（I:C）模拟病毒感染小鼠卵母细胞体外受精过程,探究病毒感染影响体外受精和早期胚胎发育的潜在作用机制。试验中,首先小鼠MII期卵母细胞随机分为6个组,分别用0,0.001,0.01,0.1,1,10μg/m L Poly（I:C）处理卵母细胞体外受精过程,并观察统计不同浓度Poly（I:C）对原核形成率、卵裂率以及囊胚率的影响,以此确定Poly（I:C）诱导浓度。然后在确定了10μg/m L Poly（I:C）作为诱导浓度后,设置对照组,检测Poly（I:C）诱导组和对照组早期胚胎发育过程中细胞免疫应激反应、DNA损伤,以及染色质重塑、纺锤体组装和囊胚增殖、分化相关基因或者蛋白的表达。结果如下:（1）1μg/m L Poly（I:C）显著降低小鼠胚胎发育过程中原核形成以及第一次卵裂（P＜0.01）,10μg/m L Poly（I:C）显著影响了原核形成、第一次卵裂和囊胚形成（P＜0.01）,因此后续试验选择10μg/m L Poly（I:C）进行诱导处理。（2）10μg/m L Poly（I:C）处理小鼠卵母细胞体外受精过程后,与对照组相比,第一次卵裂时TLR3和IFNα基因表达量上升（P＜0.05）,卵裂期的IFNα1蛋白表达量上升（P＜0.01）,说明Poly（I:C）能够引起小鼠早期胚胎产生免疫应激反应。（3）Poly（I:C）诱导了早期胚胎发育过程中二细胞胚胎的γ-H2AX表达量上调（P＜0.01）,原核期PARP1表达量下调（P＜0.05）,说明Poly（I:C）导致早期胚胎发育过程中DNA损伤上升,DNA修复能力下降。（4）试验组与对照组相比,第一次卵裂过程中异常纺锤体组装受精卵的比例显著上升（P＜0.05）,与纺锤体组装相关基因FILIA的表达量显著下降（P＜0.05）,同时,检测原核形成过程中与染色质重塑相关基因表达结果显示,Poly（I:C）处理后,CFP1和CHD1的表达量显著下降（P＜0.05）。说明Poly（I:C）处理后影响早期胚胎发育过程中染色质重塑和卵裂过程中纺锤体组装过程。（5）检测Poly（I:C）对早期胚胎发育过程囊胚细胞增殖、分化的影响,结果表明,与对照组相比,Poly（I:C）处理后,与囊胚细胞增殖SOX2、OCT4表达分别显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）下降,与囊胚分化相关的CDX2表达显著下降（P＜0.05）,但是囊胚细胞数目没有显著差异。说明Poly（I:C）会损伤囊胚增殖以及分化过程。（6）Poly（I:C）处理后,囊胚细胞凋亡率显著上升,同时促进凋亡基因CASPASE3和BAX的表达显著上升（P＜0.05）。说明Poly（I:C）可能促进了囊胚细胞凋亡。综上,Poly（I:C）可能通过诱导第一次有丝分裂过程DNA损伤以及纺锤体组装异常,降低体外受精卵裂率。随后通过诱导免疫应激反应、抑制囊胚细胞增殖和分化,促进囊胚细胞凋亡影响早期胚胎的发育。
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