【摘 要】
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第一部分胰岛素和葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达的影响目的研究不同浓度葡萄糖和(或)胰岛素对人THP-1单核细胞分化的巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇
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第一部分胰岛素和葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1表达的影响目的研究不同浓度葡萄糖和(或)胰岛素对人THP-1单核细胞分化的巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1) mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养THP-1单核细胞系,用佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由不同浓度的葡萄糖和(或)胰岛素干预12h,采用Real-time PCR法检测ACAT-1 mRNA的表达,Western blot法检测ACAT-1蛋白水平。结果巨噬细胞暴露于葡萄糖和/或胰岛素环境中,与对照组比较,低糖组ACAT-1表达无明显变化( P >0. 05),高糖组ACAT-1表达显著增加( P <0. 01)。低糖胰岛素组ACAT-1的变化明显高于高糖组( P <0. 01)。高糖胰岛素组ACAT-1变化的明显高于低糖胰岛素组( P <0. 01)。在胰岛素与高糖共同作用下,随时间的增加ACAT-1的表达呈上升趋势,到12h达到最高,随后逐渐下降,至48h时ACAT-1的表达与0h相比较没有明显变化(P >0. 05)。胰岛素(10-9～10-6mol/L)和高糖作用于巨噬细胞,随着胰岛素剂量的增加,ACAT-1表达呈上升趋势( P <0. 01)。结论在葡萄糖和/或胰岛素作用下,巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加,可能是代谢综合征时动脉粥样硬化形成的机制之一。第二部分胰岛素和葡萄糖作用于THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的信号转导途径目的研究胰岛素高糖持续刺激对人THP-1单核细胞分化的巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)活性的影响及可能的信号途径。方法体外培养人THP-1单核细胞系,用佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者分别用ERK抑制剂PD98059(PD)25μM,PI3K抑制剂Wortamanin(WT)100μM作用1h,再由胰岛素葡萄糖干预12h,并用Real-time PCR法检测ACAT-1 mRNA的水平,Western blot法检测ACAT-1蛋白的表达。结果PD作用于THP-1单核细胞分化的巨噬细胞,给予胰岛素高糖后ACAT-1的mRNA及蛋白表达水平较对照组无明显变化( P >0. 01),较胰岛素高糖组明显降低( P <0. 01)。WT作用于THP-1单核细胞分化的巨噬细胞后,给予胰岛素高糖后ACAT-1的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组( P <0. 01),较胰岛素高糖组无明显变化( P >0. 01)。结论MAPK信号传导途径可能介导了胰岛素高糖刺激人单核细胞分化的巨噬细胞ACAT-1生成,而PI3K途径则可能没有参与其中。
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