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代代花(Citrus aurantium L.var.amara Engl.)在中国是柑橘属药食两用资源,关于其药理活性的报道甚少。本文采用活性示踪法对代代花进行分离提取,并利用体内、体外多种模型对其活性进行系统研究和比较。(1)从代代花分离得到总黄酮CAVAF,生物碱CAVAA,多糖CAVAP,香豆素CAVAC,挥发油CAVAO,氯仿萃取物CHL,乙酸乙酯提取物EA和正丁醇萃取物n-Bu,并测定各成分组成和含量。活性筛选表明各主要成分对不同来源的自由基和氧化剂作用不同,CAVAP免疫增强作用较强,CAVAO,CHL和EA抗炎活性较佳,而CHL和EA则对巨噬细胞泡沫化和3T3-L1前脂肪细胞分化抑制效果更优。(2)CAVAP可显著增加巨噬细胞IL-6和TNF-α释放,上调iNOS,IL-6,TNF-α和IL-1β mRNA表达,促进ERK,JNK,P38和P65蛋白磷酸化。采用Box-Benhnken中心组合实验对CAVAP提取工艺进行优化,CAVAP得率显著增加。对CAVAP进一步分离纯化,得到两种新型纯化多糖CAVAP-Ⅰ和CAVAP-Ⅱ,二者分子量,单糖组成和糖苷键等结构明显不同。(1→3,6)-β-D-半乳糖和(1→5)-α-L-阿拉伯糖分别构成了 CAVAP-Ⅰ和CAVAP-Ⅱ的基本骨架。和CAVAP类似,CAVAP-Ⅱ可能也通过调节MAPK和NF-κB通路激活巨噬细胞,发挥免疫增强作用,且CAVAP-Ⅱ免疫活性优于CAVAP-Ⅰ。(3)CAVAO可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞IL-6,TNF-α和IL-1β分泌及其基因表达。CAVAO也能显著抑制COX-2表达,NF-κB核转位,IκBa降解和磷酸化及IκKα/β,JNK和P38磷酸化。GC-MS测定结果说明芳樟醇,α-松油醇,(R)-柠檬烯和乙酸芳樟酯可能是CAVAO发挥抗炎作用的主要物质基础。CAVAO的抗炎活性也可能是其多种成分协同作用的结果。(4)采用活性示踪法从代代花分离制得川陈皮素NOB,咖啡因CAF,高圣草素HE,南酸枣苷CHO,橙皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷HG,佛手酚BER,柚皮苷NARG和7-甲基黄嘌呤MET。HE和BER对LPS诱导的巨噬细胞释放NO有较强抑制作用。HG是HE的结构类似物,也能显著抑制NO分泌。HE,HG和BER可能通过影响MAPK和NF-κB通路发挥抗炎作用。羟基数目和位置及糖基取代等可能与HE和HG的活性差异相关。(5)油红O染色结果表明HE,CHO,HG和BER可能对ox-LDL导致的巨噬细胞脂肪积聚具有较强抑制作用。BODIPY染色,Dil-ox-LDL摄取,胆固醇摄取和外流实验说明HE,CHO,HG和BER可显著抑制巨噬细胞泡沫化。RT-qPCR和western blot测定结果表明不同化合物主要通过调节ABCA1,ABCG1,SRB1,SRA1和CD36表达发挥作用,且各化合物作用途径不同。(6)EA提取物可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减弱线虫氧化应激反应并影响线虫糖脂代谢相关基因表达。测定EA对多种突变型线虫TG含量的影响,发现EA对线虫脂质积累的抑制作用可能与mdt-15相关。EA可明显降低HFD诱导的小鼠体重增加,影响血浆生化指标值,预防附睾系白色脂肪组织肥大,肝氧化损伤和肝脂肪变性,逆转肠道菌群结构紊乱。进一步研究发现NOB,HE,HG和NARG可能通过调节C/EBPα,FAS,Leptin和PPARy mRNA表达抑制3T3-L1前脂肪细胞分化。总之,以上结果说明代代花具有多种药理活性,可被开发成功能性食品,具有良好的经济效益和社会效益。