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目的：
宫颈上皮内瘤变(CIN)是与宫颈癌(CC)关系密切的一系列前驱病变。要研究CIN，必须要有一个稳定良好的细胞模型。携带HPV16/E6E7病毒的永生化宫颈鳞状细胞Ect1/E6E7模型可作为体外细胞模型进行生物学研究。探讨叶酸对Ect1/E6E7细胞生物学特征以及宫颈病变相关标志物E-钙粘蛋白(E-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达的影响，进而分析叶酸对宫颈癌前病变的影响。
方法：
1.使用组织法、酶消法体外培养建立CIN细胞模型，利用免疫荧光技术进行鉴定；2.常规培养宫颈永生化鳞状细胞Ect1/E6E7，将Ect1/E6E7细胞株进行复苏，传代实验；3.叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM分组分别干预Ect1/E6E7细胞24h、48h，用MTT法检测叶酸对Ect1/E6E7细胞的抑制率，检测不同浓度叶酸对Ect1/E6E7细胞增殖的影响；4.WesternBlot检测叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM分组培养的Ect1/E6E7细胞中E-Cadherin、Vimentin的表达情况。
结果：
1.进行的体外CIN细胞原代培养实验，原代细胞培养时间长，细胞生长不理想，无法稳定传代进行后续实验。2.MTT法检测不同浓度叶酸对Ect1/E6E7细胞干预结果显示：相同叶酸浓度下干预不同的时间，两组之间抑制率有统计学意义(P＜0.05)；相同干预时间下，不同叶酸浓度的两组之间抑制率有统计学意义(P＜0.05)。干预24h，Ect1/E6E7细胞在叶酸浓度为200nM增殖较快，大于200nM时，细胞增殖速率降低；干预48h，Ect1/E6E7细胞在叶酸浓度为200nM时增殖较快，随后浓度升高，增殖率下降。3.WesternBlot检测结果显示：叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM时，Vimentin相对表达水平分别为1.097±0.038，0.874±0.04，0.967±0.036，0.856±0.07，0.732±0.032，0.634±0.043，E-Cadherin的相对表达量分别是：0.831±0.028，1.180±0.075，1.073±0.018，1.045±0.078，1.032±0.074，1.066±0.043，其中，与对照组(0nM)相比，不同浓度叶酸干预组Vimentin表达水平下降，差异均有统计学意义(P值分别为0.002，0.013，0.006，0.001，0.001)；与对照组(0nM)相比，不同浓度叶酸干预组E-Cadherin表达水平上升，差异均有统计学意义(P值分别为0.002，0.001，0.011，0.012，0.001)。提示随着叶酸浓度增高，Ect1/E6E7细胞中Vimentin表达降低，E-Cadherin的表达增高。
结论：
高浓度的叶酸环境抑制Ect1/E6E7细胞的增殖，抑制Ect1/E6E7细胞中Vimentin的表达，促进E-Cadherin的表达增高。叶酸对宫颈癌前病变细胞的恶性进展具有一定的保护作用。
宫颈上皮内瘤变(CIN)是与宫颈癌(CC)关系密切的一系列前驱病变。要研究CIN，必须要有一个稳定良好的细胞模型。携带HPV16/E6E7病毒的永生化宫颈鳞状细胞Ect1/E6E7模型可作为体外细胞模型进行生物学研究。探讨叶酸对Ect1/E6E7细胞生物学特征以及宫颈病变相关标志物E-钙粘蛋白(E-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达的影响，进而分析叶酸对宫颈癌前病变的影响。
方法：
1.使用组织法、酶消法体外培养建立CIN细胞模型，利用免疫荧光技术进行鉴定；2.常规培养宫颈永生化鳞状细胞Ect1/E6E7，将Ect1/E6E7细胞株进行复苏，传代实验；3.叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM分组分别干预Ect1/E6E7细胞24h、48h，用MTT法检测叶酸对Ect1/E6E7细胞的抑制率，检测不同浓度叶酸对Ect1/E6E7细胞增殖的影响；4.WesternBlot检测叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM分组培养的Ect1/E6E7细胞中E-Cadherin、Vimentin的表达情况。
结果：
1.进行的体外CIN细胞原代培养实验，原代细胞培养时间长，细胞生长不理想，无法稳定传代进行后续实验。2.MTT法检测不同浓度叶酸对Ect1/E6E7细胞干预结果显示：相同叶酸浓度下干预不同的时间，两组之间抑制率有统计学意义(P＜0.05)；相同干预时间下，不同叶酸浓度的两组之间抑制率有统计学意义(P＜0.05)。干预24h，Ect1/E6E7细胞在叶酸浓度为200nM增殖较快，大于200nM时，细胞增殖速率降低；干预48h，Ect1/E6E7细胞在叶酸浓度为200nM时增殖较快，随后浓度升高，增殖率下降。3.WesternBlot检测结果显示：叶酸浓度0、10、100、200、1000、2000nM时，Vimentin相对表达水平分别为1.097±0.038，0.874±0.04，0.967±0.036，0.856±0.07，0.732±0.032，0.634±0.043，E-Cadherin的相对表达量分别是：0.831±0.028，1.180±0.075，1.073±0.018，1.045±0.078，1.032±0.074，1.066±0.043，其中，与对照组(0nM)相比，不同浓度叶酸干预组Vimentin表达水平下降，差异均有统计学意义(P值分别为0.002，0.013，0.006，0.001，0.001)；与对照组(0nM)相比，不同浓度叶酸干预组E-Cadherin表达水平上升，差异均有统计学意义(P值分别为0.002，0.001，0.011，0.012，0.001)。提示随着叶酸浓度增高，Ect1/E6E7细胞中Vimentin表达降低，E-Cadherin的表达增高。
结论：
高浓度的叶酸环境抑制Ect1/E6E7细胞的增殖，抑制Ect1/E6E7细胞中Vimentin的表达，促进E-Cadherin的表达增高。叶酸对宫颈癌前病变细胞的恶性进展具有一定的保护作用。