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【目的】
1.检测SIRT1与lncRNASGO1-AS1表达的相关性；
2.研究lncRNASGO1-AS1对DNA损伤修复、细胞凋亡等表型的影响；
3.探讨SIRT1与lncRNASGO1-AS1在调控细胞凋亡过程中的具体作用机制。
【方法】
1.利用qPCR技术，在沉默SIRT1或者过表达SIRT1质粒的HEK293细胞中检测SGO1-AS1的表达水平；
2.在HEK293细胞中转染siSGO1-AS1，沉默SGO1-AS1的表达，并用新制癌菌素(neocarzinostatin, NCS)和顺铂(cisplatin, DDP)诱导细胞发生DNA损伤。利用Westernblot技术检测与DNA损伤相关的分子标志物(γH2A.X)的表达水平，观察SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复的影响；
3.在HEK293细胞和A549细胞中抑制SGO1-AS1的表达，随后用新制癌菌素(NCS)和顺铂(DDP)处理细胞以诱导细胞凋亡，利用检测caspase3/7活性和TUNEL等技术检测SGO1-AS1对细胞凋亡的影响；
4.在HEK293细胞和A549细胞中沉默SGO1-AS1的表达，利用Westernblot技术检测SIRT1表达水平和组蛋白H4K16的乙酰化水平，深入研究SIRT1与lncRNASGO1-AS1在调节细胞凋亡过程中的相互关系。
【结果】
1.SIRT1促进SGO1-AS1的表达
在HEK293细胞中转染SIRT1过表达质粒或者沉默SIRT1，qPCR结果显示，过表达SIRT1，SGO1-AS1表达水平升高，反之亦然。进一步利用SIRT1激活剂(SRT1720)和抑制剂(EX527)处理细胞，Westernblot结果表明SRT1720与EX527虽并不明显改变SIRT1的表达水平，但可显著影响其去乙酰化酶活性。同时qPCR显示，SRT1720可明显提高SGO1-AS1的表达水平，EX527则抑制SGO1-AS1的表达，表明SIRT1可显著促进SGO1-AS1的表达。
2.SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复无明显影响
在HEK293细胞中转染siSGO1-AS1或其对照siNC，qPCR显示，干扰片段siSGO1-AS1-2/3显著抑制SGO1-AS1的表达，而siSGO1-AS1-1抑制效率仅20%左右。沉默SGO1-AS1后用NCS或者DDP处理细胞诱导细胞发生DNA损伤，Westernblot技术检测DNA损伤相关的分子标志物(γH2A.X)的表达，表明SGO1-AS1并不显著影响DNA损伤修复。
3.SGO1-AS1抑制细胞凋亡
在HEK293或A549细胞中转染SGO1-AS1干扰片段或其对照序列，沉默SGO1-AS1后分别用NCS或者DDP处理以诱导细胞凋亡。相比于对照组，抑制SGO1-AS1表达的实验组caspase3/7活性明显升高，进一步使用TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平，显示沉默SGO1-AS1后细胞凋亡显著增加，提示SGO1-AS1可抑制细胞凋亡。
4.SGO1-AS1促进SIRT1去乙酰化酶活性
在HEK293或A549细胞中转染siSGO1-AS1干扰片段或其对照系列，Westernblot结果显示，沉默SGO1-AS1表达后，SIRT1蛋白表达水平虽未发生显著变化，组蛋白H4K16乙酰化水平显著提高，表明lncRNASGO1-AS1可促进SIRT1的去乙酰化酶活性，提示SGO1-AS1与SIRT1之间有可能存在正反馈调控环路，从而实现其生物学功能，同时对临床肺癌的诊断和治疗提供新的研究思路。
【结论】
1.SIRT1促进SGO1-AS1的表达；
2.SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复无明显影响；
3.SGO1-AS1抑制细胞凋亡；
4.SGO1-AS1促进SIRT1去乙酰化酶活性。
1.检测SIRT1与lncRNASGO1-AS1表达的相关性；
2.研究lncRNASGO1-AS1对DNA损伤修复、细胞凋亡等表型的影响；
3.探讨SIRT1与lncRNASGO1-AS1在调控细胞凋亡过程中的具体作用机制。
【方法】
1.利用qPCR技术，在沉默SIRT1或者过表达SIRT1质粒的HEK293细胞中检测SGO1-AS1的表达水平；
2.在HEK293细胞中转染siSGO1-AS1，沉默SGO1-AS1的表达，并用新制癌菌素(neocarzinostatin, NCS)和顺铂(cisplatin, DDP)诱导细胞发生DNA损伤。利用Westernblot技术检测与DNA损伤相关的分子标志物(γH2A.X)的表达水平，观察SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复的影响；
3.在HEK293细胞和A549细胞中抑制SGO1-AS1的表达，随后用新制癌菌素(NCS)和顺铂(DDP)处理细胞以诱导细胞凋亡，利用检测caspase3/7活性和TUNEL等技术检测SGO1-AS1对细胞凋亡的影响；
4.在HEK293细胞和A549细胞中沉默SGO1-AS1的表达，利用Westernblot技术检测SIRT1表达水平和组蛋白H4K16的乙酰化水平，深入研究SIRT1与lncRNASGO1-AS1在调节细胞凋亡过程中的相互关系。
【结果】
1.SIRT1促进SGO1-AS1的表达
在HEK293细胞中转染SIRT1过表达质粒或者沉默SIRT1，qPCR结果显示，过表达SIRT1，SGO1-AS1表达水平升高，反之亦然。进一步利用SIRT1激活剂(SRT1720)和抑制剂(EX527)处理细胞，Westernblot结果表明SRT1720与EX527虽并不明显改变SIRT1的表达水平，但可显著影响其去乙酰化酶活性。同时qPCR显示，SRT1720可明显提高SGO1-AS1的表达水平，EX527则抑制SGO1-AS1的表达，表明SIRT1可显著促进SGO1-AS1的表达。
2.SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复无明显影响
在HEK293细胞中转染siSGO1-AS1或其对照siNC，qPCR显示，干扰片段siSGO1-AS1-2/3显著抑制SGO1-AS1的表达，而siSGO1-AS1-1抑制效率仅20%左右。沉默SGO1-AS1后用NCS或者DDP处理细胞诱导细胞发生DNA损伤，Westernblot技术检测DNA损伤相关的分子标志物(γH2A.X)的表达，表明SGO1-AS1并不显著影响DNA损伤修复。
3.SGO1-AS1抑制细胞凋亡
在HEK293或A549细胞中转染SGO1-AS1干扰片段或其对照序列，沉默SGO1-AS1后分别用NCS或者DDP处理以诱导细胞凋亡。相比于对照组，抑制SGO1-AS1表达的实验组caspase3/7活性明显升高，进一步使用TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平，显示沉默SGO1-AS1后细胞凋亡显著增加，提示SGO1-AS1可抑制细胞凋亡。
4.SGO1-AS1促进SIRT1去乙酰化酶活性
在HEK293或A549细胞中转染siSGO1-AS1干扰片段或其对照系列，Westernblot结果显示，沉默SGO1-AS1表达后，SIRT1蛋白表达水平虽未发生显著变化，组蛋白H4K16乙酰化水平显著提高，表明lncRNASGO1-AS1可促进SIRT1的去乙酰化酶活性，提示SGO1-AS1与SIRT1之间有可能存在正反馈调控环路，从而实现其生物学功能，同时对临床肺癌的诊断和治疗提供新的研究思路。
【结论】
1.SIRT1促进SGO1-AS1的表达；
2.SGO1-AS1对细胞DNA损伤修复无明显影响；
3.SGO1-AS1抑制细胞凋亡；
4.SGO1-AS1促进SIRT1去乙酰化酶活性。