【摘 要】
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蜂王浆（Royal Jelly,RJ）,是工蜂（Apis mellifera）下咽和下颌腺产生的黄白色的酸性分泌物,略带苦味和强烈的刺激性气味,其成分复杂,具有多种生物学功能,并广泛用于医疗、保健、化妆品和其他行业。作为蜂王浆中特有的脂肪酸,10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA）也具有多种生物学功能。目前,关于RJ和10-HDA对血管内皮细胞的生物学作用和作用机制的研究还未见有报道。本研究体外建立
【基金项目】
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国家发改委中国西南药用昆虫资源开发协同创新研究基金（VQ99QT1113Y17001）；
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蜂王浆（Royal Jelly,RJ）,是工蜂（Apis mellifera）下咽和下颌腺产生的黄白色的酸性分泌物,略带苦味和强烈的刺激性气味,其成分复杂,具有多种生物学功能,并广泛用于医疗、保健、化妆品和其他行业。作为蜂王浆中特有的脂肪酸,10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA）也具有多种生物学功能。目前,关于RJ和10-HDA对血管内皮细胞的生物学作用和作用机制的研究还未见有报道。本研究体外建立H2O2致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）衰老模型,在细胞水平上探讨RJ和10-HDA对其的抗衰老作用,并进一步测定部分酶活性,以及部分细胞内和细胞间信号分子的变化,试图在分子水平上探讨10-HDA可能的抗衰老机制。希望通过此研究,为探明RJ生物学活性的物质基础,以及更好地利用RJ和10-HDA提供实验依据;为开发针对心血管疾病的保健品和药物奠定一定的理论基础。1.RJ对HUVEC细胞抗衰老作用本实验采用CCK-8法,探究了不同浓度的H2O2对HUVEC细胞的抑制作用。比较了九个浓度（0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5 mmol/L）的H2O2对HUVEC细胞的抑制作用,发现当H2O2浓度为2.5 mmol/L时,细胞增殖活力是51%,抑制作用较强,故H2O2组选用此浓度作为衰老模型浓度。接着探究了白藜芦醇（Res）作为阳性对照的最适浓度,比较了2、4、6、8μmol/L的白藜芦醇对细胞增殖活力的影响。根据实验结果,将阳性对照的浓度定为8μmol/L的白藜芦醇。通过添加RJ（25、50、100μg/m L）预处理细胞24 h,再用确定浓度的H2O2处理细胞2 h。RJ对模型细胞增殖的影响通过CCK-8法进行测定;RJ对模型细胞衰老的影响通过SA-β-Gal染色法进行测定;RJ对模型细胞周期的影响通过流式细胞术进行分析。结果表明,RJ可以促进模型细胞的增殖,降低细胞染色阳性率,并且能改善模型细胞G1期停滞的状态,从而达到延缓衰老的作用。2.10-HDA对HUVEC细胞抗衰老作用及其机制的研究本研究利用前期确定的细胞衰老模型,通过添加不同浓度的10-HDA（50、100、150μmol/L）进行干预。10-HDA对模型细胞增殖的影响通过CCK-8法进行测定;10-HDA对模型细胞衰老的影响通过SA-β-Gal染色法进行测定;10-HDA对模型细胞周期的影响通过流式细胞术进行分析;10-HDA对细胞内抗氧化酶SOD、CAT活性和MDA含量的影响通过相应试剂盒进行测定;10-HDA对模型细胞分泌IL-6和IL-8含量的影响通过酶联免疫吸附法测定;Nrf2/HO-1通路和p38MAPK通路中Nrf2、HO-1、p38和p-p38蛋白的表达水平通过Western Blot法测定。结果发现,10-HDA可以增强模型细胞活力,降低衰老细胞染色阳性率,改善模型细胞G1期停滞的状况。说明10-HDA是RJ抗HUVEC细胞衰老的有效成分之一。10-HDA可以增强模型细胞中SOD和CAT活力,降低细胞中MDA、IL-6和IL-8含量;促进Nrf2、HO-1蛋白的表达,并降低p38磷酸化水平。这表明10-HDA的抗衰老作用可能与Nrf2/HO-1通路抗氧化和p38MAPK通路抗炎症有关。
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