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目的：
应用miRNA微阵列芯片技术，对大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus，SE)后海马区脑组织与正常大鼠脑组织中miRNA的表达谱进行对比研究，筛选差异表达miRNA。并对其中差异较大的miRNA在脑组织和外周血的表达量进行检测，运用生物信息学对差异表达miRNA靶基因进行预测和验证。探讨SE后相关miRNA对中枢神经系统损伤的作用机制。
方法:
1.建立模型：采用6～8周龄健康雄性SD大鼠，建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠SE模型。于造模成功后24小时取脑组织和外周血与正常雄性SD大鼠进行比较。
2.miRNA微阵列芯片筛选差异表达miRNA：提取大鼠脑组织海马区的miRNA，采用miRNA微阵列芯片技术研究SE后大鼠海马区脑组织与正常大鼠海马区脑组织中miRNA表达谱的差异。
3.荧光定量RT—PCR验证差异表达的miRNA：选取有明显差异表达的miRNA，采用荧光定量RT—PCR对其在脑组织海马区的表达进行验证。并对其在大鼠外周血中的表达进行检测，对比脑组织和外周血中的表达差异。
4.生物信息学分析预测靶基因：利用MiRanda软件、TargetScan软件和PicTar软件预测相关差异表达的miRNA的靶基因。
5.Western Blot检测靶基因：根据预测的结果，采用WesternBlot对相关靶基因在SE后大鼠海马区的表达进行检测。
结果:
1.SE大鼠和正常大鼠海马组织差异表达miRNA：运用miRNA微阵列芯片，在SE后大鼠海马区脑组织中检测出上调的miRNA基因37个，下调的28个。其中上调大于5倍的miRNA基因为miR-34a、miR-22、miR-125a、miR-213、miR-30c、miR-26a、miR-375、miR-99a、miR-24、miR-124a、miR-101—1。表达差异最大的是miR-34a(25.86倍)，差异最小的是miR-188(1.42倍)。下调大于5倍的基因有miR-21、miR-29a、Let-7e、miR-181、miR-215、miR-128a、miR-181b，其中miR-21下调最明显为27.97倍。
2.荧光定量RT-PCR验证差异表达miRNA：选择上调最明显的3个(miR-34a、miR-22和miR-125a)和下调最明显的2个(miR-21和miR-29a)，采用实时荧光定量PCR对SE后大鼠脑组织海马区和外周血中差异miRNA的表达进行检测和对比。miR-34a、miR-125a和miR-22表达上调，miR-21表达下调，与芯片结果一致；miR-29a未见与芯片一致的结果。所有目标miRNA在脑组织和外周血的变化趋势均一致；miR-34a、miR-125a和miR-34a在脑组织中表达量高于外周血，miR-22和miR-21脑组织中的表达量低于外周血。
3.靶基因预测结果：利用生物信息学方法对miR-34a、miR-125a、miR-22和miR-21进行靶基因预测，结果提示miR-34a和miR-125a的上调可能调控Bcl-2，miR-21的下调可能调控Caspase-3的表达；这些靶基因都被认为与神经元凋亡有关。
4.Western—Blot检测预测靶基因的表达：对SE后大鼠海马组织的Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达进行检测，结果与预测的一致，Bcl-2的表达下调，Caspase-3的蛋白表达上调；这些都将促进神经元凋亡。
结论:
1.建立了癫痫持续状态后大鼠和正常大鼠海马区脑组织的miRNA差异表达谱。
2.发现miR-34a、miR-22、miR-125a、miR-21和miR-29a在大鼠脑组织和外周血中的变化趋势一致，有密切的相关性，为进一步将外周血检测miRNA用于相关研究提供依据。
3.miR-34a和miR-125a的靶基因可能是Bcl-2，miR-21的靶基因可能是Caspase-3，它们参与SE后神经元凋亡的调节。