目的抑郁症逐渐成为现代社会的常见及高发疾病,给社会和患者的生活都带来了巨大的压力,但抑郁症发病机制复杂,明确抑郁症的发病机制,对于抑郁症的诊治至关重要。本研究以中医“肝郁”与抑郁症的相似性为切入点,基于抑郁模型PFC-NAc-VTA神经环路的病理生理变化,旨在阐释中医“肝郁”发生的中枢机制,并通过观察疏肝和胃汤对抑郁模型PFC-NAc-VTA神经环路的影响作用研究其抗抑郁机制,为深入研究中医药治疗抑郁症提供理论和实验依据。方法1.理论研究:采用文献分析法,归纳古今医家对抑郁症相关病证的临床辨治规律,并梳理《伤寒杂病论》中抑郁症相关病证的辨治规律,分析中医肝郁与抑郁症的相关性;通过整理PFC-NAc-VTA神经环路与抑郁症发病的联系,分析中医肝郁的中枢机制与PFC-NAc-VTA神经环路的相关性。2.实验研究:(1)模型制作及评价:采用慢性不可预知性应激结合孤养法造模4w,造模完成后给予三种不同浓度疏肝和胃汤及氟西汀干预7d,并运用旷场实验、强迫游泳实验进行行为学评价。(2)神经环路相关指标的检测:采用尼氏染色法观察抑郁模型大鼠PFC脑区切片的病理改变,并统计PFC区正常神经元的数目;采用高效液相法分别检测抑郁模型大鼠PFC、NAc及VTA三个脑区中DA、GABA、Glu含量;采用RT-PCR检测抑郁模型大鼠NAc区PSD95m RNA、NR2B m RNA的相对表达量;采用western blot检测抑郁模型大鼠NAc区PSD95、NR2B的相对表达量。结果1.理论研究:古代医家认为,抑郁症与情志之郁证关系密切,可兼夹诸郁,又涉及脏腑功能紊乱及气血津液的失调。现代临床辨证规律研究显示,情志失调为抑郁症的主要病因,肝失疏泄为抑郁症病机核心,以影响及心、脾、胃等多脏腑为抑郁症的传变特点,以气血津液阴阳失调为抑郁症的病理变化特点,治法以疏肝解郁,调畅气机为主。现代医学认为抑郁症的发病机制与PFC-NAc-VTA神经环路的功能失调相关,因此可以从PFC-NAc-VTA神经环路为切入点探讨“肝郁”的中枢机制。2.实验研究:实验一:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠行为学的影响(1)模型组旷场实验静止时间延长,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组静止时间缩短,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)模型组旷场实验总运动距离缩短,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组总运动距离增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组总运动距离较氟西汀组长,差异有统计学意义(P<0.01),高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)模型组旷场实验中央区域穿越格数减少,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中、高剂量组及氟西汀组中央区域穿越格数增多,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)模型组强迫游泳实验不动时间延长,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组不动时间缩短,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验二:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠PFC区病理变化的影响(1)光镜下尼氏小体呈深蓝色或紫蓝色,多为块状或细颗粒状,分布于核周围或树突内,尼氏体靠近胞体周围处较为明显。空白组PFC区神经元数目较多,尼氏小体颜色较深,分布于细胞核周围。神经元细胞形态饱满,结构完整,边缘清晰;模型组PFC区神经元数目相对较少,尼氏小体颜色较淡,分布疏松,细胞形态不规则,结构不完整,尼氏小体数目减少或消失,部分细胞核偏向一侧,细胞肿大,出现空泡区;经过治疗药物干预后,各治疗组尼氏小体数目较模型组增多但少于空白组,较模型组尼氏小体颜色更深,结构较完整、清晰。(2)模型组PFC区正常神经细胞数量减少,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组PFC区正常神经细胞数量增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验三:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠PFC-NAc-VTA神经环路中DA、GABA、Glu含量的影响(1)PFC区中,模型组DA含量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中、高剂量组及氟西汀组DA含量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其中,疏肝和胃汤高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NAc区中,模型组DA含量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组DA含量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VTA区中,模型组DA含量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤低、中剂量组及氟西汀组DA含量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其中,疏肝和胃汤低、中剂量组DA含量较氟西汀组低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)PFC区中,模型组Glu含量升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组Glu含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组Glu含量较氟西汀组低,差异有统计学意义(P<0.05),低、高剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NAc区中,模型组Glu含量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中剂量组及氟西汀组Glu含量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。VTA区中,模型组Glu含量升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组Glu含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其中,疏肝和胃汤各剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)PFC区中,模型组GABA含量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中剂量组及氟西汀组GABA含量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NAc区中,模型组GABA含量升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中、高剂量组GABA含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组与氟西汀组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。VTA区中,模型组GABA含量升高,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤中剂量组及氟西汀组GABA含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验四:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠NAc区PSD95 m RNA和NR2B m RNA表达的影响(1)模型组NAc区PSD95 m RNA的相对表达量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组NAc区PSD95 m RNA的相对表达量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组PSD95 m RNA的相对表达量高于氟西汀组,差异有统计学意义(P<0.01);低剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)模型组NAc区NR2B m RNA的相对表达量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组NAc区NR2B m RNA的相对表达量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤各剂量组NAc区NR2B m RNA的相对表达量高于氟西汀组,差异有统计学意义(P<0.01)。实验五:疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠NAc区PSD95和NR2B表达的影响(1)模型组NAc区PSD95相对表达量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组PSD95相对表达量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤中、高剂量组PSD95相对表达量高于氟西汀组,差异有统计学意义(P<0.01),低剂量组与氟西汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)模型组NAc区NR2B相对表达量降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);疏肝和胃汤各剂量组及氟西汀组NR2B相对表达量升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);其中,疏肝和胃汤低、中剂量组NR2B相对表达量高于氟西汀组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1.古代医家所论之“郁”涉及范围较广,包括五运六气之郁、脏腑之郁及情志之郁等,至明清以后专论郁证,才与现代抑郁之“郁”联系紧密。2.近十年来抑郁症的中医病因及证候分布规律研究显示,情志失调为抑郁症的主要病因,肝失疏泄为其病机核心,以影响及心、脾、胃等多脏腑为其传变特点,以气血津液阴阳失调为其病理变化特点,治法以疏肝解郁,调畅气机为主。3.慢性应激引起的PFC区神经元病理改变,PFC-NAc-VTA神经环路DA含量的降低、Glu含量的升高、GABA含量的相应改变,以及NAc区突触相关蛋白PSD95、NR2B及其m RNA表达的下降,可能是抑郁症的发病机制。4.疏肝和胃汤能够改善抑郁模型大鼠的抑郁状态,并且能减轻抑郁模型大鼠PFC区神经元的受损程度,调节PFC-NAc-VTA神经环路中DA、Glu、GABA含量的异常上升或下降,且能够逆转模型大鼠NAc区突触相关蛋白PSD95、NR2B及其m RNA的异常下调,提示疏肝和胃汤可能是通过对PFC-NAc-VTA神经环路中上述指标的调节发挥抗抑郁作用的。5.中医“肝郁”发生的中枢机制可能与PFC区神经元病理变化,PFC-NAc-VTA神经环路中DA、Glu、GABA的异常表达以及NAc区突触相关蛋白PSD95、NR2B及其m RNA的异常下调有关。6.研究结果提示,疏肝和胃汤发挥抗抑郁作用的潜在机制之一,可能是通过调节PFC-NAc-VTA神经环路中的多个靶点实现的。