牛病毒性腹泻病(Bovine viral diarrhea,BVD),是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种疾病,症状主要表现为腹泻,急、慢性黏膜病,持续性感染,免疫抑制与免疫耐受,母畜流产、畸胎和死胎等。BVDV宿主较为广泛,可以感染牛、猪、羊、骆驼和其他多种野生动物。该病在全世界广泛分布,由于该病毒能引起繁殖系统病变并形成持续性感染,因而对养牛业造成了重要的影响。BVDV属于黄病毒科瘟病毒属成员,与其同属的有猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(DBV)及部分未分类瘟病毒。BVDV基因组含有一个大的开放阅读框架(ORF)和两侧的非翻译区(UTR),编码10~11种蛋白。E2是BVDV的结构蛋白之一,是免疫原性最强、变异性最强的糖蛋白,在靠近N末端的一半含有多种依赖构象的抗原结构区,其N端伸出BVDV囊膜表面,是决定BVDV抗原性的主要部位,也是与BVDV抗体结合、介导中和反应及宿主细胞识别、吸附的主要部位,E2蛋白上存在区分瘟病毒的抗原决定簇。BVDV和CSFV具有很高的同源性和非常相似的感染谱,给疾病的鉴别诊断带来了一定的困难。因此,本试验利用BVDV E2的重组真核表达质粒pcDNA3.1-E2免疫BALB/c小鼠,用纯化的BVDV全病毒作为阳性杂交瘤细胞的筛选抗原,经4次克隆制备了3株单克隆抗体,命名为2E2、3D12、4D6。2E2和4D6株抗体为IgM类,3D12为IgG2a亚类,轻链均为κ链。通过Western blot和间接免疫荧光检测发现:3株单抗均针对E2的构象表位,其中2E2和4D6株单抗针对的表位不是BVDV和CSFV所共有,所制备的3株单抗为鉴别诊断方法的建立提供了物质基础。NS3是BVDV的一种非结构蛋白,主要负责病毒多聚蛋白的翻译后加工,产生成熟的病毒蛋白,是病毒自我复制的前提条件。NS3在瘟病毒属中非常保守,是一种免疫优势蛋白,在自然感染或弱毒疫苗免疫后的动物体内均可检出针对该蛋白的抗体。目前国内还未见BVDV-NS3单抗的报道。本试验利用实验室原核表达的NS3全长蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了5株单克隆抗体,命名为1C8、2H4、4B5、4F6、4F8。1C8,4F8为IgG2b亚类;2H4为IgG1亚类;4B5,4F6为IgG2a亚类,轻链均为κ链。5株单抗效价均较高,通过Western blot鉴定,5株单抗均能与重组NS3蛋白特异性结合。所制备的5株单抗为BVD检测方法的建立及NS3蛋白的研究提供了物质材料。