论文部分内容阅读
肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)简称肝癌,是一种常见的恶性肿瘤,全球每年新增HCC患者人数超过60万,近年来HCC的发病率及死亡率仍呈上升趋势。我国每年HCC发病及死亡人数均占全球一半以上,大部分HCC发生在慢性肝疾病-肝硬化的基础上。但HCC发病后无明显的症状和体征,因此导致大多数患者确诊时已错过了行手术等根治性治疗的时机。经动脉栓塞术(transarterial embolization,TAE)等介入治疗是非手术HCC的首选治疗手段,其原理是阻断肝肿瘤的动脉供血,导致肿瘤组织缺血坏死,同时给予化疗药物或植入放射性粒子进行综合治疗。但由于HCC组织血液供应的复杂性,临床上在栓塞肿瘤动脉时很难避免正常肝组织的栓塞,导致这部分其缺氧损伤,加重原有的肝纤维化程度,出现肝功能失代偿等并发症,使得HCC进行TAE治疗的远期疗效受到影响。多种因素可以启动肝脏损伤-修复过程,激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)并使肝脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢失衡。TAE治疗通过造成组织缺氧起到杀伤肿瘤细胞的作用,而缺氧也是导致栓塞的非肿瘤肝组织损伤的关键因素。缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是缺氧时存在于体内的一种转录因子,其在肝脏的缺氧损伤中起到重要的作用。HIF-1能够通过诱导多种促纤维化因子表达,使HSC活化为成肌纤维细胞,促进ECM的合成并抑制其降解,进而导致肝纤维化的形成。然而目前还缺少针对缺氧及HIF-1进行肝纤维化治疗的方法。2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME2)是一种雌激素的代谢产物,能够在转录后水平抑制HIF-1的活性,其在肿瘤治疗方面的研究已经成为热点。因此,本研究从2-ME2对HIF-1的抑制作用出发,利用大鼠肝动脉结扎术(hepatic arterial ligation,HAL)模拟临床TAE治疗造成的肝动脉缺血缺氧,观察2-ME2在缺氧诱导的肝纤维化形成过程中的作用。本研究的目的:利用大鼠HAL诱导肝纤维化动物模型,观察2-甲氧基雌二醇对于肝动脉缺氧诱导的肝纤维化形成的抑制作用及其分子机制。方法:雄性Sprague Dawley(SD)大鼠30只,随机分为对照组、HAL+安慰剂组和HAL+2-ME2组,每组10只。对照组行假手术,手术游离出肝固有动脉后即缝合腹腔及腹壁;HAL+安慰剂组行HAL术后给予腹腔注射含有二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)作为安慰剂;HAL+2-ME2组行HAL术后每日腹腔注射2-ME2药物5mg/kg。14天后处死实验动物并取肝组织石蜡包埋切片,行苏木精-伊红(hematoxylin- eosin,H-E)染色及天狼星红-苦味酸染色,观察组织纤维化程度;碱水解法测定肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,了解胶原组织增生情况;免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测肝组织中HIF-1α及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,研究2-ME2对HIF-1α表达及HSC活化的影响。结果:H-E及天狼星红-苦味酸染色显示HAL术后大鼠肝脏细胞大量变性坏死,纤维组织增生,肝纤维化程度较对照组明显升高(P<0.05);2-ME2治疗后大鼠肝组织结构破坏和胶原纤维沉积减少,肝纤维化程度较HAL+安慰剂组明显降低(P<0.05)。2-ME2治疗后大鼠肝组织中HYP含量较HAL+安慰剂组明显降低(P<0.05),但较对照组升高(P<0.05)。HAL+安慰剂组大鼠肝脏HIF-1α及α-SMA表达升高,2-ME2治疗后肝组织中HIF-1α及α-SMA的表达均降低(P<0.05)。结论:2-ME2能够下调肝动脉结扎术后大鼠肝脏HIF-1α的水平,减少HSC活化及肝组织中胶原蛋白含量,降低缺氧诱导的肝纤维化程度。