以碳酸酐酶Ⅱ与水通道蛋白1、4表达诠释“气津”于“肺病及肠”病理传变中的意义

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“肺与大肠相表里”是中医学基础理论之一,首见于《内经》,《灵枢本输篇》曰:“肺合大肠,大肠者,传导之腑”。中医学认为,“肺与大肠”通过经脉络属构成表里相合关系,如《灵枢经脉篇》中记载:“肺手太阴之脉,起于中焦,下络大肠”,“大肠手阳明之脉,络肺下膈,属大肠”。“肺与大肠”生理上相互依存、病理上相互影响。鉴于“肺与大肠”的相关性,临床上治疗二者病变时,除直接治疗肺或大肠本脏本腑病变之外,还可根据二者表里相合理论,或肺病治肠,或肠病治肺,或肺肠同治,或虚实补泻。为更好的认识这一理论,对其现代机理的认识也日趋深入,取得的成果层出不穷,主要体现在以下几方面:胚胎源、公共粘膜免疫、气体排泄途径、内分泌物质、神经系统、肠源性内毒素和神经-内分泌-网络系统等相关[1]。鉴于此理论在中医学中的重要性,揭示其现代生物学机制以更好的指导临床遣方用药具有重要意义;同时亦为促进中医现代化和国际化提供一定依据。中医学认为,“肺与大肠”生理上相互联系,主要体现为肺气肃降与大肠传导之间的相互依存;病理上相互传变,主要体现在气机下达不及和易为燥邪所伤,即“气”与“津”两方面,我们遂以此为切入点以初步探讨“肺病及肠”部分病理传变规律。材料与方法:1.实验动物:SPF级SD大鼠40只,按体重随机分为正常对照组(对照组)和慢性支气管炎模型组(模型组),每组各20只。2.模型制备:采用改良烟熏法复制慢性支气管炎即(肺病)大鼠模型。3.实验方法:应用HE染色观察大鼠肺与近端结肠组织病理变化;运用干湿重比观测两组大鼠粪水含量变化;利用硝酸还原酶法观察血浆中一氧化氮(Nitricoxide,NO)含量变化;运用酶联免疫吸附测定法(Enzyme linkedimmunosorbent assay,ELASA)观测血浆、支气管肺泡灌洗液(Bronchus-associated lymphoid tissue, BALF)及肺与近端结肠组织匀浆中碳酸酐酶(Carbonic anhydrase)、血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)、P物质(substance P, SP)含量变化;采用免疫组化染色及Western-blot等检测方法观察肺与近端结肠组织中水通道蛋白1、4(Aquaporin1/4,AQP1/4)和碳酸酐酶Ⅱ(Carbonic anhydraseⅡ,CAⅡ)的表达变化。力图通过以上研究初步探讨“肺津与肠津”、“肺气与肠津”相关性;探讨“肺与大肠”血循环关系,以初步揭示“肺病及肠”部分病理传变规律及机制。结果:1.一般情况:对照组大鼠精神状态佳,毛色光泽,排便正常;模型组大鼠精神状态欠佳,毛色枯黄,排软便、粪便呈褐色偏黑,且出现咳嗽症状。2.病理结果:对照组大鼠肺泡结构清晰,肺泡壁无增厚和破坏;气道粘膜上皮完整无损坏,纤毛无粘连脱落;气道管腔规整、管壁无增厚,未见炎细胞浸润。模型组大鼠肺泡壁结构紊乱、增厚,有淋巴细胞浸润和吞噬色素沉着。两组大鼠近端结肠粘膜上皮细胞完整,腺体结构与杯状细胞正常,但模型组大鼠近端结肠组织发现有炎细胞浸润。3.粪水含量:与对照组相比,模型组大鼠粪水含量显著增加,有统计学差异(P<0.05)。4. NO含量:两组相比,模型组大鼠血浆中NO含量显著升高,有统计学差异(P<0.05)。5. VIP含量:两组相比,血浆、BALF及肺与近端结肠组织匀浆中VIP含量无统计学差异(P>0.05)。6. SP含量:两组相比,血浆、BALF及肺与近端结肠组织匀浆中SP含量无统计学差异(P>0.05)。7. CA含量:与对照组相比,模型组大鼠BALF中CA含量显著降低(P<0.05),有统计学差异;而血浆及肺与近端结肠组织匀浆中CA含量无统计学差异(P>0.05)。8.肺组织AQP1表达:免疫组化染色显示AQP1表达于肺组织微血管内皮细胞和肺泡壁上皮细胞。半定量免疫印迹分析提示,与对照组相比,模型组大鼠肺组织AQP1表达显著下降,有统计学差异(P<0.05)。9.肺与近端结肠组织AQP4表达:免疫组化染色显示气道粘膜上皮细胞基底侧有AQP4表达,两组平均光密度分析显示模型组明显降低,有统计学差异(P<0.05)。免疫组化染色发现AQP4表达于近端结肠粘膜顶部吸收细胞,以基底侧和腔面为主。两组平均光密度分析,模型组显著降低,(P<0.05)有统计学差异。10.肺与近端结肠组织CAⅡ表达:免疫组化染色显示CAⅡ表达于肺泡壁上皮细胞的细胞质。半定量免疫印迹分析提示,与对照组相比,模型组表达显著降低,(P<0.05)有统计学差异。免疫组化染色显示近端结肠粘膜上皮细胞的细胞质内有CAⅡ表达,半定量免疫印迹分析,两组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:1. AQP1/4可能是“肺病及肠”病理传变中“肺津与肠津”关系的分子基础之一;CAⅡ可能是肺主气与“气化作用”的分子基础之一,至于CAⅡ在“肺病及肠”病理传变中的意义有待进一步验证。2. CAⅡ与AQP1/4可能是“肺病及肠”病理传变中“肺气与肠津”相关性的分子基础之一。3.本研究中两组大鼠血浆、BALF及肺与近端结肠组织匀浆中VIP、SP含量无统计学差异,我们推测可能与模型特异性或病变累及程度有关,有待近一步验证。4. AQPs与VIP及SP与结肠粘膜水的吸收和分泌紧密相关,而CAs与VIP及SP相关性缺乏文献依据,因此上述物质间的相关性有待进一步验证,此正是我们未来研究的创新点/切入点。5.药物干预以从功能上验证“肺津与肠津”和“肺气与肠津”在“肺病及肠”病理传变中的意义,是我们未来研究的重点。
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