人抗氧化蛋白Peroxiredoxin 1和2的表达、纯化及功能研究

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人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1)和Peroxiredoxin2(Prx2)是人体内重要的过氧化物酶,具有清除过氧化物、保护机体免受氧化损伤和参与信号传导等重要生理功能。蛋白组学研究证实Prx1在淋巴瘤,肉瘤,乳腺癌等疾病患者中表达上调;Prx2则在骨肉瘤、阿兹海默症和宫颈癌等疾病患者体内有高表达情况,这表明Prx1和Prx2在疾病诊断治疗方面可能具有重要意义。本文成功构建了pET28-Prx1和pET28-Prx2原核表达载体,实现了重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)的表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白主要为上清表达,且分子量均与预期大小(~24kD)一致。重组表达后的蛋白经Ni-NTA螯合亲和层析后产量分别达到了7.59mg/g菌体和8.82mg/g菌体,纯度分别为88.5%和91.5%。Western Blotting结果显示纯化后的蛋白带有组氨酸标签,说明成功实现了人Prx1和Prx2在大肠杆菌中的重组表达。纯化后的Prx1和Prx2在37℃和pH7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km分别为2.06×10-4M和1.56×10-4M。质粒保护实验表明Prx1和Prx2可以保护pUC18质粒遭氧化损伤由超螺旋变成缺刻状态。通过从细胞形态学,凋亡检测和ROS检测结果证实紫外照射会引起细胞内ROS含量上升,过量的ROS则会导致细胞凋亡;Prx2的加入可以在一定程度上保护细胞免受紫外引起的氧化损伤,Prx1的保护效果则不明显。本文对Prx1和Prx2的抗氧化性质的研究为其可能在食品防氧化、化妆品工业和部分疾病的诊断治疗等领域的应用奠定了基础。
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