禁止和限制大量高毒、高残留农药的使用,开发和使用生物源农药已成为时代发展的需要,研发生物源农药具有重要的意义。水稻白叶枯病是一种世界性的水稻重要细菌病害。长期大规模使用防治水稻白叶枯病的主要药剂噻枯唑,已使病原菌产生了抗药性。盾壳霉被公认为最具开发潜力的生防菌之一,姜道宏等(1998)发现盾壳霉Chy-1菌株可以产生拮抗多种细菌的活性物质,其中对水稻白叶枯病菌的拮抗作用非常显著。初步试验发现这种抗生物质具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,具有潜在的田间应用价值。因此,研究盾壳霉代谢抗白叶枯病菌活性物质具有重要意义。本文研究了盾壳霉代谢抗白叶枯病菌活性物质的性质、定量分析、分离纯化,并对分离得到的活性物质结构进行了分析。
　　主要内容和结论如下:1.研究了盾壳霉活性物质的提取方法和稳定性。通过对比盾壳霉三种培养方式和不同溶剂提取的活性实验结果,发现麦粒扩大培养能产生大量的盾壳霉代谢产物,采用甲醇多次浸提能有效提取抗白叶枯病菌活性物质。试验初步表明活性物质是非水溶性的,中等极性,在多种有机溶剂中能溶解。在121℃下处理1h和在180d内放置在暗室或自然光等条件下抑制白叶枯病菌活性没有太大的变化,表明代谢活性物质具有比较好的稳定性,适合田间应用必须满足的条件。
　　2.研究了基于紫外/可见光谱技术的盾壳霉代谢物抗菌活性检测方法。利用紫外/可见光谱技术对盾壳霉代谢抗白叶枯病菌活性物质进行了定量检测,采用拟合线性对比的方法,通过实验实现代谢活性产物定量检测,与常用的抗菌活性检测方法进行对比,结果表明当代谢物质量浓度在14.84-207.79ug/mL范围内,定量检测和活性检测的预测的相关系数分别为0.999和0.992。相比生物活性测试,采用光谱技术可以辅助测定活性,具有灵敏度高、操作简便、快速等优点。分光光度法方法可靠、检测结果准确、稳定,能够为研究盾壳霉代谢抗白叶枯病菌活性产物及其它微生物的相关研究提供一种快速有效的检测技术。
　　3.通过纸层析、纸电泳、多级萃取分离、薄层色谱、液相色谱对活性物质进行分离和纯化。用石油醚与丙酮4:1(V/V)做展开剂进行薄层色谱分离,进一步纯化活性物质,活性试验表明抑制白叶枯病菌活性明显,活性物质有效部位主要集中在这部分。通过纸层析、纸电泳、液相色谱的分析结果,推测盾壳霉代谢产生的抗白叶枯病菌活性物质可能是两种中性化合物,属于与放线菌素抗生素具有同样或相似溶解性质的抗生素。
　　4.对盾壳霉代谢活性物质的结构进行了分析。通过气质联用、紫外光谱、红外光谱对分离纯化活性物质的结构分析,推断盾壳霉代谢产生的抗白叶枯病菌活性物质可能是含有酰胺键的抗生素。而且是相对分子质量都为279的两种小分子物质。酰胺键可能就是该活性物质活性基团,与目前抗白叶枯病菌主要药物的活性基团相似。