目的：血管新生（angiogenesis）在肿瘤生长、侵袭及转移中的重要地位与抗血管新生治疗的意义在肿瘤学领域已经得到了确认，血管新生是指在已经存在的血管网的基础上以出芽的方式形成新的微血管的过程。生理条件下发生的血管新生是一严格受控的过程，而病理性的血管新生是一个失控无序的过程，这种持续的无规则血管新生促进了疾病的发展。现代理论认为肿瘤的生长分为无血管期和血管期，在无血管期由于肿瘤主要依赖周围组织的弥散作用来获取营养物质和排泄代谢产物，所以明显地限制了肿瘤的继续生长，肿瘤的直径不超过1～2mm；而在血管期肿瘤内出现新生的毛细血管并获得了进一步生长的能力，从而肿瘤迅速生长并发生转移。在实体肿瘤已证实肿瘤的生长、浸润、转移和预后与肿瘤的血管新生密切相关。血管新生是由刺激因子和抑制因子共同调控的，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor ,VEGF）是目前已知作用最强、特异性最高的血管新生刺激因子，VEGF与其受体特异性结合后，可以促进内皮细胞的增殖、提高血管通透性以及改变细胞外基质使其更易于血管的生长。VEGF还可以通过瘤细胞的旁分泌、自分泌途径直接促进瘤细胞的生长。多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是一种浆细胞恶性增生性疾病，经传统的治疗不能完全清除骨髓瘤细胞，大多数患者在缓解后短期内复发，因此探讨MM的发病机制及寻找新的安全有效的治疗方法是十分必要的。近年来，三氧化二砷(arsenic trioxide ,As2O3)被成功用于治疗常规化疗或维甲酸治疗后复发的急性早幼粒细胞白血病以后，砷剂成为国际血液、肿瘤学界研究的热点，研究发现As2O3对急性早幼粒细胞白血病以外的多种恶性血液病和实体瘤均有效。本研究的目的在于探讨MM中是否存在病理性血管新生以及是否存在VEGF的过度表达，探讨血管新生和VEGF在MM中的临床意义，同时探讨As2O3治疗MM的具体作用机制，希望为MM寻找一种安全有效的治疗方法。方法：1. 临床资料：收集 1999年1月～2002年11月于河北医科大<WP=5>学第三医院初诊的42例MM患者，诊断、分期及疗效判断均符合《血液病诊断及疗效标准》, 化疗给予VAD+干扰素方案，于化疗后第三周骨髓抑制恢复后复查。采集血清标本：MM患者分别在治疗前后留取标本；对照组18例，来自职工健康查体。采集骨髓标本：MM患者采集治疗前后髂后上嵴骨髓穿刺及活检组织标本；收集本院骨科、心外科手术切除的髂骨及肋骨10例标本作为对照。MM组和对照组在年龄、性别组成方面无显著性差异，对照组除外血管新生异常的个体。2. 微血管显示及计数方法：采用Ⅷ-R-Ag免疫组织化学染色显示微血管,凡是染色成单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管来计数，管腔大于8个红细胞，带较厚肌层的血管不计入微血管。每张切片于100倍光镜下选择3个微血管最多的区域作为“热点区”，于400倍光镜下（视野范围0.2376㎜2）计数每个“热点区”的微血管数，取其均值来表示微血管密度。3. VEGF 酶联免疫吸附试验检测方法：采用双抗体夹心ELISA法，操作按产品说明书进行。4. VEGFmRNA原位杂交检测方法：原位杂交操作按产品说明书进行，采用病理图像分析系统对图像进行分析，VEGFmRNA转录水平用积分光密度值及平均光密度值表示。5. 骨髓单个核细胞的分离和培养：无菌条件下于髂后上嵴抽取骨髓液2ml，肝素抗凝，采用Ficol淋巴细胞分离液分离。将分离的单个核细胞以2×106/ml密度接种于24孔培养板，培养于含10%的灭活FBS的完全RPMI 1640培养液中，每孔2.0ml，每例接种6个复孔。在37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%的培养箱中培养72h后分别离心收集上清，-20℃冻存。6. 细胞凋亡的流式细胞术检测: 定期收集的细胞，经洗涤、固定、破膜及碘化吡啶染色，流式细胞仪检测， Multicycle DNA Content and Cell Cycle Analysis Software软件获取并分析数据，分析G1、G2、S期及亚G1期细胞（凋亡细胞）百分比。7. bcl-2表达的流式细胞术测定:采用FITC标记的仓鼠抗人bcl-2单抗，采用直接免疫荧光流式细胞检测。操作严格按照产品说明书进行。应用流式细胞仪SystemⅡ和Exto-analysis 软件获取并分析数据，以阴性对<WP=6>照设阳性界值，荧光强度大于此界值者为阳性细胞，bcl-2蛋白表达水平以阳性细胞百分数表示。8. RPMI8226、U266细胞系培养：以2×105/ml密度培养于RPMI 1640培养液中，置37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%培养箱中培养，每2～3天传代一次，试验时用对数生长期细胞。9. 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的分离与培养：脐静脉内皮细胞来自胶原酶消化后的婴儿脐带，以2×105/ml密度培养于含体积分数为20%的灭活胎牛血清、5ng/ml rhVEGF、5ng/ml rhbFGF的M199培养液中，置37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度为100%培养箱中培养，每2～3天换液一次。试验时用传至第3代的生长良好的内皮细胞。 10. VEGF和As2O3对RPMI8226、U266细胞增殖、细胞活力、细胞凋亡、bcl-2蛋白表达及VEGF合成的影响:将对数生长期细胞悬液以2×105/ml密度接种于24孔培养板，每孔2.0ml，分别加入终浓度为10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml的VEGF 和1μmol/L 、2