中国卤虫Ste20激酶在不同发育时期及在高渗透压下的表达

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:xiangwang111
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中国卤虫隶属于节肢动物门(Phylum Arthropoda),壳纲(Crustacea),无甲目(Anostacea),卤虫属(Artemia)。主要分布于山西、新疆、西藏、青海、内蒙等内陆盐湖、盐井等高盐水体中,渗透调节功能对卤虫维持其在高渗透压下的生存起关键作用。中国卤虫因其自身发育时期的特点,渗透压调节的器官亦有所不同。无节幼体时期主要依靠盐腺来调节,到了成虫期则主要依靠附肢调节。在酵母中Ste20的信号通路已研究的较为彻底,但是在低等动物和哺乳动物还尚未清楚。因此本实验可以为Ste20激酶调节渗透压信号通路的研究提供参考价值。本研究采用生物信息学通过从美国卤虫EST文库的数据库中搜索出一条美国卤虫Ste20激酶家族的片段序列,通过在NCBI序列同源性比对,该片段与Ste20激酶家族有着较高的相似性。NCBI保守区域的分析,该段序列含有Ste20激酶家族保守的功能催化区。根据这段序列设计引物进行RT-PCR,得到了222bp片段经测序与美国卤虫文库中的Ste20激酶相似度达100%。采用半定量PCR对40h中国卤虫在不同渗透压条件下(盐度为2.8%,10%,15%,20%)Ste20激酶的表达情况进行了初步探究,发现Ste20激酶的表达量随盐度的增大而增大,说明Ste20激酶可能与渗透压的调节有关。采用整体免疫组化技术对中国卤虫不同发育时期的表达部位进行研究,结果发现0h,5h和10小时Ste20在虫卵内表达较为平均,15h和20h Ste20主要在卤虫无节幼体的头胸部表达,但20h在腹部已有少量表达,到40h表达的主要部位还是头胸部,腹部两侧少量表达,3d的Ste20表达部位集中头胸部、腹部表面及肠道,5d集中在头胸部、腹部表面及肠道以外,卤虫附肢也有部分表达,到了7d附肢和头胸部、腹部表面及肠道是主要的表达部位。最后采用实时荧光定量PCR对Ste20激酶在不同发育时期的表达量进行研究,结果发现Ste20激酶在中国卤虫不同发育时期的表达量不同,在20小时前后表达量最高,其余时期Ste20表达量较为均衡。推测Ste20激酶不仅具有调节渗透压的功能,而且还可能参与调节胚胎发育、细胞生长和分化等相关生理生化过程。
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