肝素结合蛋白（HBP）是新型的炎症标志物,与多种感染性疾病有显著的相关性,临床上把HBP作为了多种疾病的诊断标志物。建立方便快速、特异性强和灵敏度高的HBP检测方法对提高感染类疾病的诊断效率具有重要意义,而高亲和力的HBP抗体决定了HBP的生物检测方法的灵敏度和准确性。因此,本研究基于杂交瘤技术制备了高亲和力的HBP单克隆抗体,并建立了HBP免疫层析荧光定量检测方法和HBP磁微粒化学光检测方法。主要研究结果如下:（1）以HBP重组蛋白作为免疫原,对BALB/C小鼠进行皮下免疫,免疫后取小鼠静脉血测量血清抗体效价可达到1:1×10~5;通过连续的亚克隆筛选培养后获得了7株可稳定分泌抗HBP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株;采用体内诱生法制备腹水的效价均达到1:1×10~6;磁分选亲和纯化得到7株抗体,间接ELISA检测抗体效价均可达1:1×10~5mg/m L;SDS-PAGE结果显示,抗体的纯度均达到90%。通过Fortebio分子互作仪测定亲和力,抗体的亲和力均小于10-9M。（2）通过Fortebio分子互作仪初步筛选HBP配对抗体,通过荧光免疫层析方法确定22C5为包被抗体,30G11为标记抗体。以信噪比T/C值对荧光免疫层工艺优化。最佳工艺如下:C线上羊抗兔Ig G的浓度为0.5 mg/m L,T线上的HBP包被抗体浓度为2mg/m L,C/T线喷膜宽度均为1.0 mm,微球HBP标记抗体浓度为0.4 mg/m L,免疫荧光微球的胶乳稀释比例为20%,反应时间为20 min,样本稀释比例为1:1。以优化后的工艺构建了HBP荧光免疫检测体系,并进行性能评价。该检测体系的检测限为3.37 ng/m L,检测范围为3.37-1440 ng/m L;在低中高浓度点的样品回收率分别为98.85%、98.18%、98.81%,准确性较高;三个浓度点10次重复的变异系数为2.97%、3.80%、5.13%,批内和批间差CV均小于5%,精密度较高;与炎症类似物降钙素原、C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A没有交叉,添加血浆干扰物胆红素、甘油三酯、血红蛋白、总蛋白后对检测无干扰,特异性好。（3）以22C5为磁珠包被抗体,30G11为碱性磷酸酶标记抗体,构建了HBP磁微粒化学发光检测体系。对化学发光反应条件进行了优化,最佳反应参数为:反应模式为一步法,磁微粒抗体稀释比为1:50,碱性磷酸酶抗体稀释比为1:200,孵育时间为5min,样本量为5μL。对构建的HBP磁微粒化学发光检测方法进行性能评价,该方法检测限为4.74ng/m L,检测范围为4.74-1440 ng/m L;在低中高浓度点的样品回收率分别为100.78%、99.03%、98.58%,准确性较高,三个浓度点10次重复的变异系数为1.54%、1.92%、2.49%,分析批内和批间差CV均小于5%精密度较高;与炎症类似物降钙素原、C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A没有交叉,添加血浆干扰物胆红素、甘油三酯、血红蛋白、总蛋白后对检测无干扰,特异性好。对比两个检测方法,荧光免疫层析试剂盒所需的设备简单,适合小范围的筛查,可在小型医院或社区医院推广;磁微粒化学发光试剂盒需要大型仪器,反应时间短,样本量小,适合大型筛查。