【摘 要】
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BMP4是BMPs蛋白家族中的一员,对卵泡颗粒细胞与膜细胞类固醇激素的分泌以及颗粒细胞分化有着调节作用,并且在有些物种上对颗粒细胞的增殖或凋亡也产生影响。而颗粒细胞的增殖
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BMP4是BMPs蛋白家族中的一员,对卵泡颗粒细胞与膜细胞类固醇激素的分泌以及颗粒细胞分化有着调节作用,并且在有些物种上对颗粒细胞的增殖或凋亡也产生影响。而颗粒细胞的增殖与凋亡对卵泡发育来说至关重要。因此,本试验拟探究BMP4对鹅等级前卵泡颗粒细胞增殖或凋亡的影响。通过基因克隆获得鹅的BMP4基因完整CDS区序列,并采用实时荧光定量技术检测其在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞与膜细胞中的相对表达量。通过构建其真核表达载体pEGFP-N1-BMP4,使用脂质体转染法对颗粒细胞进行转染来探究BMP4对鹅颗粒细胞增殖与凋亡的影响。取得的主要研究结果如下:(1)鹅BMP4基因CDS区序列全长为1212bp,其核苷酸序列与斑胸草雀的同源性高达96.3%,编码的氨基酸序列同源性为98.3%。(2)鹅BMP4基因mRNA在颗粒细胞中的相对表达量均高于其在相同卵泡发育阶段的膜细胞中的表达量(卵泡直径为6-8mmm的发育阶段除外)。BMP基因mRNA在小卵泡颗粒细胞中表达量较低,随后表达量逐渐上升,于直径8~10mm的卵泡及F5中表达量达到最高,随后又开始迅速下降。膜细胞BMP4基因mRNA表达量在直径6~8mm的卵泡中最高,且这一卵泡发育阶段中BMP4基因mRNA在膜细胞表达量要高于颗粒细胞,而在卵泡其他发育阶段中膜细胞BMP4 mRNA表达量均低于颗粒细胞。(3)颗粒细胞转染36h后,BMP4转染转染组OD值显著高于对照组(P<0.05),其他组无显著性差异。说明在转染BMP4基因36h后颗粒细胞活细胞数目高于对照组。(4)颗粒细胞转染36h后,转染组颗粒细胞增殖数目与对照组相比差异不显著,而颗粒细胞凋亡数目相较对照组下降(P<0.05)。(5)实时荧光定量法检测转染组与对照组颗粒细胞的凋亡相关基因BCL2、 caspase-3 mRNA表达量变化,转染组与对照组相比caspase-3基因表达量显著降低(P<0.05)。
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