论文部分内容阅读
自从1957年英国科学家Isaacs和Lindenmann发现干扰素(Interferon,IFN)以来,干扰素的分子结构、基因结构和分子生物学特性一直被人们所关注。干扰素是一种低分子量的可溶性糖蛋白,具有抗病毒和抗肿瘤的作用。干扰素分为Ⅰ型干扰素和Ⅱ型干扰素,前者包括IFN-α和IFN-β等,IFN-α具有很强的抗病毒能力。IFN-α主要由白细胞、Namalwa细胞、KG-1细胞、B淋巴细胞、慢性髓性白血病细胞、鸡新城疫病毒(NDV)或水泡性口炎病毒(VSV)等诱导后的成纤维细胞产生。用本实验室已构建的含鹅α干扰素基因的真核表达载体pcDNA3.1-IFN-α作为免疫原,免疫Balb/C鼠,以原核表达的重组GoIFN-α作为检测抗原,检测抗鹅α干扰素的单克隆抗体。经过细胞融合,以间接ELISA方法和有限稀释法进行筛选,经3~5次亚克隆,获得2株能稳定分泌抗鹅α干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2H6和4C8。经鉴定,2株杂交瘤细胞染色体数目分别为103和89条;单抗亚类均为IgM,轻链为κ链;杂交瘤细胞株连续传20代以上及冻存后复苏,细胞生长良好,效价稳定;腹水效价均达到10-4以上;Western blot表明,McAb 2H6及4C8与重组鹅IFN-α均能发生特异性反应;竞争ELISA检测结果显示,McAb 4C8能与天然干扰素发生竞争抑制作用,为进一步进行干扰素的检测奠定了基础。由于2株单抗与天然及重组干扰素发生的特异性反应有所区别,估计2株细胞抗体可能分别针对不同的抗原表位;单抗中和活性检测结果显示,McAb 4C8能够中和天然干扰素的抗病毒作用。总之,McAb 2H6及4C8的制备为进一步研究和检测鹅IFN-α提供了有利的前提条件,并为鹅α干扰素在免疫机制研究、免疫功能检测、纯化鹅IFN-α等领域提供了广泛的应用前景。