连翘为木犀科（Oleaceae）植物连翘（Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl）的果实,具有清热解毒、消肿散结的功效,主治温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、以及小便淋闭等症。连翘叶作为连翘的非药用部位,资源丰富,且连翘叶中熊果酸等三萜酸类成分、连翘酯苷等苯乙醇苷类成分和连翘苷等木脂素类成分的含量明显高于果实,但连翘叶目前作为非药用部位大多被废弃,造成了严重的资源浪费。为了进一步开发连翘叶的药用和饲用价值,使其得到合理的开发利用,本文对连翘叶中的化学成分进行了提取分离,并对其进行了抗氧化、抗肿瘤的活性筛选与作用研究,以期为连翘叶在畜牧生产与兽医临床上的应用开发提供试验基础和理论依据。第一部分:连翘叶化学成分的提取分离采用D101大孔树脂、硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱（HPLC）等多种方法对连翘叶中的化学成分进行提取、分离、纯化,得到10个化合物,通过质谱（MS）,核磁共振（NMR）等方法进行结构鉴定,10个化合物分别为:连翘酯苷I（FSI,1）、连翘酯苷H（FSH,2）、连翘酯苷A（FSA,3）、连翘酯苷B（FSB,4）、连翘苷（PHI,5）、松脂素-β-D-葡萄糖苷（PIN,6）、连翘脂素（PHG,7）、白桦脂酸（BA,8）、熊果酸（UA,9）、齐墩果酸（OA,10）。同时,本文采用水提取、大孔树脂分离得到连翘叶不同极性溶剂的洗脱部位,并对连翘叶提取物不同极性部位中的上述成分进行了含量测定,结果表明,30%乙醇洗脱部位中主要成分为连翘酯苷A等苯乙醇苷类成分,60%乙醇洗脱部位中主要成分为连翘苷等木脂素类成分,90%乙醇部位中主要成分为熊果酸等三萜类成分。第二部分:连翘叶化学成分的抗氧化作用研究采用化学法和过氧化氢（H2O2）诱导的RAW264.7细胞模型,对从连翘叶中提取分离得到的10种化学成分进行了抗氧化活性筛选,结果表明,连翘叶中FSA、FSB、FSH和FSI成分对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基有较好的清除能力,显著优于PHI、PHG、PIN、UA、OA、BA成分（P＜0.05）。同时FSA、FSB、FSH和FSI可显著提高H2O2诱导的巨噬细胞RAW264.7中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力（P＜0.05）,提高细胞中还原性谷胱甘肽（GSH）的含量（P＜0.05）,降低丙二醛（MDA）含量（P＜0.05）,缓解H2O2诱导的细胞氧化损伤。经热图分析及主成分分析,发现FSA、FSB、FSH、FSI 4种苯乙醇苷类成分与其抗氧化能力呈正相关。表明连翘叶中苯乙醇苷类成分具有较好的抗氧化活性。第三部分:连翘叶苯乙醇苷对肉鸡生长性能与抗氧化能力的影响畜禽在养殖过程中极易受到多种应激因素影响,迫切需求开发出安全、有效、稳定的天然抗氧化剂。本文探讨了连翘叶苯乙醇苷（F30）对肉鸡抗氧化能力的作用效果,试验选取1日龄AA白羽肉仔鸡144只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复6只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础日粮中分别添加125、250、500 mg/kg的连翘叶苯乙醇苷提取物（F30）,试验期42 d。结果表明:与对照组相比,添加500 mg/kg F30可显著提高21～42、1～42日龄肉鸡的平均日增重（ADG）,显著降低料重比（F/G）;添加250、500 mg/kg F30可显著提高21日龄肉仔鸡胸腺指数及42日龄肉仔鸡胸腺、脾脏、法氏囊指数;添加500mg/kg F30可显著提高21日龄和42日龄肉鸡血清、肝脏中抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活力、降低MDA水平。综上所述,肉鸡基础饲粮中添加连翘叶苯乙醇苷提取物F30可提高肉鸡生长性能、促进免疫器官发育、提高抗氧化能力,以添加500 mg/kg的效果最佳。第四部分:连翘叶化学成分的抗肿瘤作用研究采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,对连翘叶中化学成分进行抗肿瘤活性的筛选,结果表明,UA、OA、BA与连翘叶三萜提取物（F90）均具有较好的抗肿瘤活性。为了进一步探讨连翘叶化学成分的抗肿瘤作用,本文进行了连翘叶三萜提取物（F90）对乳腺肿瘤细胞的作用效果研究,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,罗丹明123（Rh123）染色法检测细胞线粒体膜电位（MMP）变化,DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧（ROS）的含量变化,荧光共聚焦显微镜检测F90在细胞中的摄取和定位,Western Bolt法检测F90对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,连翘叶三萜提取物（F90）能够显著抑制MCF-7和MDA-MB-231乳腺肿瘤细胞增殖;同时,Annexin V-FITC/PI双染试验、Rh123染色试验、DCFH-DA染色试验结果显示,F90能够诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡,细胞MMP下降（P＜0.01）,细胞内ROS含量升高（P＜0.01）,并呈现一定的浓度依赖性。荧光共聚焦显微镜试验结果显示,F90进入细胞后主要作用于细胞的线粒体和溶酶体中,且呈现剂量和时间依赖性。Western Blot试验结果表明,F90能够激活Caspase-3蛋白活化,同时上调Cleaved caspase-3、促凋亡蛋白（BAK）、线粒体动力相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂蛋白1（FIS1）的表达。综上所述,F90能够抑制乳腺肿瘤细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖,促进肿瘤细胞凋亡。其作用机制可能与降低细胞MMP,提高细胞内ROS水平,靶向线粒体和溶酶体,激活caspase-3,上调Cleaved caspase-3、BAK、DRP1、FIS1的表达有关。近年来,兽医临床中尤其是宠物临床中肿瘤疾病的发病率呈逐年上升的趋势,肿瘤性疾病已成为威胁宠物生命的主要原因之一,因此本研究结果对连翘叶作为抗肿瘤药物的研发提供了一定的试验基础。综上所述,本研究采用D101大孔树脂、硅胶柱色谱和HPLC制备等多种方法对连翘叶中化学成分进行分离纯化,得到10个化合物;同时采用水提取大孔树脂富集的方法得到了连翘叶不同极性的提取物,并对其抗氧化、抗肿瘤作用进行了研究。结果发现FSA、FSB、FSH、FSI 4种苯乙醇苷类成分显示出较好的抗氧化活性,且在肉鸡饲粮中添加连翘叶苯乙醇苷可以提高肉鸡生长性能、促进免疫器官发育、提高机体抗氧化能力,以添加500 mg/kg连翘叶苯乙醇苷的效果最佳;UA、OA、BA 3种连翘叶三萜类成分显示出较好的抗肿瘤活性,且连翘叶三萜能够显著抑制乳腺肿瘤MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖,诱导并促进细胞凋亡。其作用机制可能与降低MMP,提高细胞内ROS水平,靶向线粒体和溶酶体,激活caspase-3,上调Cleaved caspase-3、BAK、DRP1、FIS1的表达有关。