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长时间大剂量使用抗生素,导致耐药菌株的大量产生、动物正常菌群失调、畜产品中药物残留等问题。益生菌作为一种无毒、无残留、无抗药性的饲料添加剂,受到了人们的广泛关注,成为抗生素有效的替代产品之一。为开发益生性肠球菌,本研究采集猪的肛门直肠内容物,共分离了22株细菌,初步鉴定为肠球菌属。22株肠球菌发酵液对指示菌均有明显的抑菌活性,其中TC1、TC3、TC9、HB6、TC12、TC13等6株肠球菌的抑菌效果最明显。对该6株肠球菌进行种的鉴定,鉴定结果表明TC3为屎肠球菌,HB6、TC12、TC13为粪肠球菌,TC1、TC9还有待进一步鉴定。经体外抑菌试验和主要生化特性鉴定,初步筛选了4株肠球菌：TC3、HB6、TC12、TC13。以16S rRNA基因序列和种特异性片段ddlE.faecalis. ddlE.faecium为引物扩增,进一步确证了4株肠球菌的鉴定结果是正确的。为了确保菌株的安全性,要对初步筛选出来的4株肠球菌进行安全性评价,即毒力因子和抗生素抗性的检测。毒力因子的检测包括cylA、gelE、esp.agg.ace、efaAfs、efaAfm等基因片段的PCR扩增。检测结果为：屎肠球菌TC3有1个毒力基因efaAfm+；粪肠球菌HB6及粪肠球菌TC13均有3个毒力基因,为cylA+esp+efaAfs+；粪肠球菌TC12有4个毒力基因,为agg+cylA+esp+efaAfs+。因此选取屎肠球菌TC3进行抗生素抗性的检测。结果显示：屎肠球菌TC3仅对青霉素、红霉素表现耐药,对环丙沙星表现中度敏感,对氨苄西林、万古霉素、四环素、诺氟沙星、呋喃妥因、氯霉素均表现敏感。试验表明筛选的屎肠球菌TC3是安全的。为了筛选动物肠道中的有益优势菌,研究了屎肠球菌TC3的生长情况、耐受特性及对小肠粘膜的粘附性。结果表明,屎肠球菌TC3在pH2.5孵育2h后,其活菌数为4.10×107 CFU/mL,下降很小；在pH2.0孵育2h后,其细菌数仅下降了一个数量级,为2.20×106 CFU/mL;该菌能耐受0.5%胆盐。由此推测,屎肠球菌TC3能顺利通过胃肠道。屎肠球菌TC3不能耐受70℃以上的高温。该菌繁殖能力很强,无迟缓期,很快进入对数增长期(0h～4h),4h后进入稳定期,一直持续到18h,细菌数达到最大,为3.50×109 CFU/mL,18h后进入衰退期。粘附性试验表明,屎肠球菌TC3与粘蛋白有明显的粘附性(p<0.05)。