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目前,低致病性禽流感病毒(mildly pathogenic avian influenza virus,MPAIV)在我国分布较广,对鸡群的产蛋率、肉鸡的增重有明显影响,尤其是和大肠杆菌混合感染时可产生一定的病死率,在肉鸡可招致较高致死率,给养禽业造成了严重的经济损失。迄今,有关MPAIV与大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)协同致病作用机理的研究很少。针对MPAIV H9亚型在我国分布较广,MPAIV与禽大肠杆菌病常并发、继发等实际情况,在SPF鸡以不同方式人工感染MPAIV和E.coli O26株后,对试验鸡的致死率、对细菌在血液及各脏器的动态分布、病理变化、MPAIV的排毒规律等作了深入研究,以探索两者之间可能的协同致病作用,为揭示这两种疾病并发、继发的原因,最终控制其流行提供理论依据。 1.实验鸡经不同顺序接种H9亚型禽流感病毒、禽源大肠杆菌后死亡率比较试验 将10日龄SPF鸡随机分组,每组25羽,隔离饲养,气管内接种。A组10日龄接种MPAIV;B组10日龄同时接种大肠杆菌和MPAIV;C组10日龄接种大肠杆菌,48h后再接种MPAIV;D组10日龄接种MPAIV,48h后再接种大肠杆菌;E组10日龄接种大肠杆菌;F组作为健康对照组。在各组攻毒结束后,观察死亡情况,结果如下: A、B、C、D组死亡率分别为12%、32%、16%、24%,E组没有死亡,进行卡方检验后,A、B、C、D与E组、B与A组死亡率差异显著。 结果表明:与单独接种MPAIV或E.coli组相比,先MPAIV后大肠杆菌接种组的死亡率有了明显的提高,同时接种组的死亡率有显著的提高,而先接种大肠杆菌再接种MPAIV,死亡率的变化不明显,表明协同致病程度与2种病原接种顺序的先后有关。 2.实验鸡单独或混合感染禽源大肠杆菌后细菌的动态分布 将10日龄SPF鸡随机分组,每组27羽,隔离饲养。A组10日龄气管内接种大肠杆菌;B组10日龄气管内同时接种大肠杆菌与MPAIV;C组为健康对照组。各组在接种后1-96定时分批扑杀:观察它们的临诊症状,并进行细菌学检查。其结果如下: 细菌学检查发现各组的气管、肺、血液、脾脏、肝脏和肾脏中细菌数量与接种时间有关:①A组接种后12-72h出现菌血症,B组在接种后3-96h出现菌血症。细菌数后者恒高于前者;②各试验组肺中的检菌率明显高与其它脏器。比较B、A两组发现,B组肺中细菌明显减少时间延长12h,在这延长时间内细菌数目差异极显一著;③A、B组气管接种后 lh出现细菌的增殖,但 B组气管中细菌增殖比。迅速,细菌数目也比A组多,l2 细菌数目差异显著,在3h后差异不显著。④各组脾脏。肾脏和肝脏在接种后偶尔可以分离到细菌,而且数量很少。 上述结果表明:试验鸡经气管接种病原性大肠杆菌后,细菌主要在肺中定居并大量繁殖,进入血液,引起全身反应;联合感染大肠杆菌和MPAIV后,可使大肠杆菌在肺中定居时间延长。3.实验鸡人工感染Hg亚型禽流感病毒、禽源大肠杆菌后呼吸器官的超微动态病理变化 将10日龄SPF鸡随机分组,接种组30羽、对照组20羽,隔离饲养。A组10日龄气管内接种大肠杆菌;B组IO日龄气管内同时接种大肠杆菌和*PA w:C组10日龄气管内接种 MPAIV;D组为健康对照。在接种后定时分批扑杀,采集气管、肺等进行组织学的超微病理切片和常规病理切片观察。其结果如下: 组织病理学观察可见,B组气管和肺的炎症发生时间早于其它组,恢复也慢,肺在接种大肠杆菌和 MPAIV后第 lh开始出现炎症一直持续至试验结束,气管粘膜纤毛严重脱落。 超微结构观察结果为:B组在接种大肠杆菌和 MPAIV后 4-48h,气管纤毛全部脱落,整个粘膜层均可见MPAIV粒子;肺在接种大肠杆菌和 MPAIV后 6h,肺11型上皮细胞全部溶解成空泡,只留下I型上皮细胞,严重病变持续到接种后48h,仍可见*型上皮细胞细胞器空泡化。 E COlf O26株可引起气管纤毛细胞的损伤,而 MPAIV不仅能破坏气管粘膜的上皮细胞,而且还能损害肺组织中的*型上皮细胞。当 E COn与MPAIV混合感染时,气管、肺的病变更为严重。4.实验鸡单独或混合感染Hg亚型禽流感病毒后气管、肺及泄殖腔样品的病毒分离 10日龄叩F鸡随机分组,接种组30羽。对照组15羽,隔离饲养。A组12日龄气管内接种*PA w:B组12日龄气管内同时接种大肠杆菌与MPA IV:C组IO日龄气管内接种大肠杆菌dh后再气管内接种MPA W:D组u 日龄气管内接种MPAIV,48h后再气管内接种大肠杆菌;E组作为健康对照组。在MPAIV接种后的第7-17天内,定时分批扑杀,采其气管和肺,研磨成组织匀浆液,同时采其泄殖腔棉拭样,进行病毒的分离。 结果显示:两种病原联合感染时,对病毒在气管、肺中的滞留时间无明显影响;但联合感染组试验鸡泄殖腔排毒时间略长于MPAIV单独接种组。