论文部分内容阅读
目的:(1)建立重现性好,样品前处理简单的大鼠生物体液亲水色谱紫外检测(HPLC-HILIC-DAD)指纹图谱。在此基础上了解炎症模型干预组与正常组是否具有不同的代谢表型,获得炎症模型干预组与正常组代谢表型差异的特征峰。(2)建立同时测定马尿酸、尿酸、尿囊素、肌酸和肌酐这五种代谢物含量的HPLC-HILIC-DAD方法,了解不同性别大鼠和炎症大鼠尿液中这些代谢物是否有差异。方法:(1)运用角叉菜胶对大鼠进行炎症造模,分别收集炎症造模组和对照组尿液、血液和肝肾组织样品,样品经处理后用建立的HPLC-HILIC-DAD方法进行检测,然后运用主成份分析法(PCA)以及偏最小二乘判别分析(PLS-DA)方法对原始数据进行聚类分析,得到的载荷图,获得引起分类差异的特征峰组。(2)大鼠16只,分四组,每组4只,分别为雌性正常组、雌性炎症组、雄性正常组和雄性炎症组,在常温下收集12h尿液。尿液处理后以HPLC-HILIC-DAD亲水柱为色谱柱;75%乙腈(A)+25%0.5%磷酸+5mmol/mL磷酸二氢铵(B)为流动相,恒度洗脱,流速设为0.8mL/min,检测波长为205nm,柱温为30℃,对尿液中马尿酸、尿酸、尿囊素、肌酸和肌酐进行检测。结果:(1)所建立的HPLC-HILIC-DAD方法重现性好,样品前处理简单。在此基础上发现了炎症模型干预组与正常组具有不同的代谢表型,通过PLS-DA聚类分析获得了引起大鼠生物体液(尿液和肝肾脏提取液)炎症模型干预组与正常组代谢表型差异的特征峰,并对这些峰进行了收集浓缩,但对这些主要特征峰组的结构鉴定还有待进一步研究。特征峰组中保留时间为26.5—26.6min的物质为尿酸;保留时间为33.2—33.4min的物质为肌酸,保留时间为33.5—34.0min的物质为肌酐。(2)所建立的HPLC-HILIC-DAD方法专属性强,在3.0—250.0μg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系,良好的精密度及较高的准确度;在此基础上发现雌性大鼠与雄性大鼠的尿酸/肌酐具有明显的差异性;发现炎症大鼠和正常大鼠尿液尿酸/肌酐和肌酸/肌酐含量也具有明显差异。结论:(1)建立了重现性好,样品前处理简单的大鼠体液HPLC-HILIC-DAD指纹图谱。(2)发现炎症模型组与正常组各体液(尿液、血液、肝肾组织提取物)具有不同的HPLC-HILIC-DAD代谢表型。并且利用化学计量学方法找出了引起差异的特征色谱峰组。(3)建立了可用于同时检测尿液中马尿酸、尿酸、尿囊素、肌酸和肌酐HPLC-HILIC-DAD方法。发现雌雄大鼠尿液尿酸/肌酐比值差异明显,炎症大鼠和正常大鼠尿液尿酸/肌酐和肌酸/肌酐含量也具有明显差异。另外,炎症大鼠尿液中马尿酸和尿囊素含量明显下降,提示炎症能明显影响体内核苷酸分解代谢和肠道菌群。