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第一章应用微阵列芯片技术筛选非小细胞肺癌的circRNAs表达谱研究目的应用circRNAs微阵列芯片技术检测非小细胞肺癌组织和邻近正常上皮组织差异表达的circRNAs,初步建立非小细胞肺癌的circRNAs表达谱。方法收集3例在南方医科大学珠江医院行手术治疗的非小细胞肺癌患者的肺癌组织和邻近正常上皮组织,使用Trizol(lInvitrogen)法提取组织总RNA。使用紫外分光光度计检测RNA的浓度和纯度,通过甲醛变色凝胶电泳检测RNA完整性。抽提的RNA通过质检后,扩增富集的circRNAs并转录成荧光cRNA。纯化标记的cRNA。测量标记的cRNA的浓度和比活性。标记完成后,制备50μl杂交溶液并分配到垫片载玻片中并组装到circRNAs表达微阵列载玻片上,芯片杂交完成后洗涤,使用Axon GenePix4000B进行图像扫描,提取探针的信号值,用T检验来确定差异表达基因的显著性(p<0.05)。使用Fold change和P-value筛选两组样品间的差异表达circRNAs。结果总RNA质量鉴定结果:总RNA质量鉴定结果:A260/A280比值均接近2.0,A260/A230比值均大于1.8,表明所有组织标本的总RNA质量可靠,没有降解或其它杂质污染,如DNA、蛋白质等,可进行后续的微阵列芯片等实验。circRNAs微阵列芯片筛选结果表明,与正常肺上皮组织相比,非小细胞肺癌表达上调超过2倍的circRNAs有103个,表达下调超过2倍的有81个(p<0.05)。兙结论非小细胞肺癌及邻近正常的肺上皮组织之间存在显著差异表达的circRNAs,这些显著差异表达的circRNAs可能与非小细胞肺癌的发病、疾病的发生发展密切相关。第二章差异表达circRNAs的靶基因预测和通路分析研究目的运用生物学信息软件预测circRNAs靶基因,初步探究circRNAs对非小细胞肺癌的发生发展的影响机制方法依据Fold Change值、P值、原始信号值等选出了八个较为理想的circRNAs进行靶基因预测,然后采用基于Targetscan、miRTarBase、miRDB、MicroRNA.org靶基因预测数据库建立的预测软件分析显著差异表达的circRNAs与非小细胞肺癌基因之间的关系。结果选出的八个显著表达差异的circRNAs靶基因预测结果,每个circRNAs根据预测软件中的相关基因互补关系。结论miRNA基因海绵是已知的最普遍的circRNAs发挥功能的途径之一,根据预测的这些靶基因,分析circRNAs通过影响miRNA来参与非小细胞肺癌的发生和发展。第三章应用实时荧光定量PCR技术验证非小细胞肺癌组织中差异表达的circRNAs研究目的对通过微阵列芯片实验获得的且于非小细胞肺癌相关基因互补关系的差异表达的circRNAs,我们在非小细胞肺癌标本与内参上应用实时荧光定量PCR技术进行进一步验证。方法选取2016年11月至2017年3月在南方医科大学珠江医院胸心外科肺癌根治术的患者,共3例,根据这些患者所提供的组织标本进行qRT-PCR验证,标本的取材及保存方法同第一章。按照操作说明使用样品的RNA进行cDNA合成、荧光定量PCR。结果qRT-PCR证实:circRNAs-453相对表达水平低于内参,差异具有统计学意义(p=0.03548<0.05);circRNAs-60461相对表达水平高于内参,差异具有统计学意义(p=0.00336<0.05);circRNAs-86694相对表达水平高于内参,差异具有统计学意义(p=0.01498<0.05)。结论circRNAs芯片筛选结果和实时荧光定量PCR验证结果几本一致,证实了非小细胞肺癌和正常肺上皮组织间确实存在异常表达的circRNAs,而我们筛选出并且验证过的circRNAs-60461和circRNAs-86694很有可能与非小细胞肺癌的发病有关系。circRNAs-60461和circRNAs-86694的异常表达和非小细胞肺癌的发生发展可能相关,探讨circRNAs-60461和circRNAs-86694的功能对我们下一步的生物功能实验和动物实验都奠定了良好的基础,提供了新的思路和平台。