【摘 要】
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目的:探究4-甲基咪唑(4-MI)对骨髓间质干细胞(BMSCs)生物学特性的影响用来说明对人体可能产生的潜在毒性作用;研究真皮间质干细胞(DMSCs)和胶原-壳聚糖支架之间的生物相容性
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目的:探究4-甲基咪唑(4-MI)对骨髓间质干细胞(BMSCs)生物学特性的影响用来说明对人体可能产生的潜在毒性作用;研究真皮间质干细胞(DMSCs)和胶原-壳聚糖支架之间的生物相容性。 方法:(1)采用全骨髓法分离培养大鼠BMSCs，借助细胞形态学特征以及表面抗原标记来对其进行生物学特性鉴定。(2)采用MTT法检测4-MI对BMSCs增殖能力的影响，通过浓度梯度筛选出100μg/ml作为后续实验的作用浓度;通过平板克隆实验来检测4-MI对BMSCs克隆形成能力的影响;通过Transwell实验来检测4-MI对BMSCs迁移能力的影响;流式细胞仪分析4-MI对BMSCs细胞周期和凋亡的影响;通过ALP染色和油红O染色以及RT-PCR检测BMP-3、PPARγ-2的表达水平分析4-MI对BMSCs多向分化能力的影响;RT-PCR检测4-MI作用后，BMSCs细胞因子的表达情况;染色体核型分析检测4-MI对BMSCs染色体数目和形态的影响。(3)分离培养新生SD乳鼠DMSCs。(4)制备胶原-壳聚糖支架。(5)观察DMSCs在胶原-壳聚糖支架上的形态特征，并进行细胞黏附性检测;MTT实验检测DMSCs在支架上的增殖活性。 结果:(1)MTT结果表明4-MI可以抑制BMSCs的增殖，并呈浓度与时间依赖性，当实验组4-MI浓度为100μg/ml时，BMSCs在克隆形成能力、迁移、成骨成脂分化、细胞周期、细胞凋亡以及分泌具有造血支持作用的细胞因子方面，与对照组相比并无统计学差别，同样在染色体的数目和形态上也未发生明显异常改变。(2)显微镜下观察到胶原-壳聚糖支架呈现三维立体网格结构，DMSCs能够在支架上黏附生长，并维持良好的细胞形态;MTT检测结果显示OD值增高。 结论:(1)在体外培养条件下，相对低浓度(≤100μg/ml)的4-MI对BMSCs的增殖、迁移、多向分化以及BMSCs分泌的具有造血支持功能的细胞因子能力都未产生明显影响。(2)真皮间质干细胞和胶原-壳聚糖支架之间具有良好的生物相容性。
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