红树林纤维素酶产生菌产紫青霉HBZ003发酵条件及酶学性质

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对筛选自红树林环境的纤维素酶高产菌株产紫青霉HBZ003(Penicillium purpurogenum)进行了发酵条件研究,确定了该菌株的最佳发酵产酶培养基及发酵条件。对所产纤维素酶进行了分离纯化,并对其部分酶学性质进行了研究。产紫青霉HBZ003的最佳发酵条件为:麸皮16 g/L, CMC 4 g/L, (NH4)2SO4 5 g/L, KH2PO43 g/L, NaCl 6 g/L, CaCl20.5 g/L, Tween-200.5mL/L,初始pH4.0,接种量10%,培养时间5d,温度30℃,发酵液装量100mL/250mL,摇床转速160r/min。在该条件下测得的CMCase和FPA分别为16.04U和4.08U。为尽量减少杂蛋白,最终选定硫酸铵饱和度区间为20-60%,从而使纤维素酶得到充分的初步纯化;通过硫酸铵分级沉淀、透析以及Sephadex G-100层析等纯化步骤,分离纯化出产紫青霉HBZ003纤维素酶系中分别具有内切葡聚糖苷酶(简称Cx)活性和β-葡萄糖苷酶(简称BG)活性的组分,纯化后两种酶的比活力分别提高至6.52和19.30,回收率分别为21.79%和28%;对纯化后所得的分别具有内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶活性的酶液作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示多条带,推测酶液分别由Cx和BG酶的三个亚基或者三种蛋白组成,其分子质量分别为80kD、65kD、55kD和150kD、120kD、100kD;Cx酶的Km值为2.03×10-2g/mL, Vmax为0.20mg/(min.mL), BG的Km值为4.23×10-3g/mL, Vmax为0.37mg/(min.mL); Cx酶在35℃-70℃之间酶活较高,BG酶55℃-70℃之间酶活较高;Cx酶和BG酶在30-55℃的温度范围内保温0.5h,均可保持90%以上的酶活力;Cx酶和BG酶的最适pH范围分别在3-5之间和3.5-6之间;Mn2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+对Cx酶有激活作用,Mg2+、Co2+则对Cx酶有抑制作用,Mn2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+对BG酶有激活作用,而Ca2+、Mg2+、Co2+则对其有抑制作用。
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