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第一部分水稻T-DNA整合的遗传定位与位置效应 水稻是世界上最重要的粮食作物之一,近年来根癌农杆菌介导的水稻遗传转化获得了很大的进展。本实验室将水稻抗白叶枯病基因Xa21基因导入到我国的8个水稻品种中。利用转抗白叶枯病基因Xa21的水稻材料,通过TAIL-PCR方法扩增T-DNA整合的侧翼序列。从中筛选属于水稻基因组DNA的T-DNA整合的侧翼序列作为探针,将外源基因整合位点定位到窄叶青/京系17 DH群体构建的水稻分子连锁图谱上。共获得属于水稻基因组DNA的T-DNA侧翼序列22个,其中的19个序列在定位群体的两个亲本之间显示RFLP多态性,分别定位在水稻基因组的第3,4,5,7,9,10,11和12染色体上。转基因Xa21的T-DNA整合的定位为研究外源基因在不同染色体位点的位置效应和稳定遗传打下基础。 植物转基因表达与外源基因在植物染色体上的整合位点息息相关。为了研究不同拷贝数和不同整合位点对外源Xa21基因表达的影响,在明恢63转Xa21水稻材料转基因T0代中,获得2个单拷贝、2个双拷贝的转基因株系;通过连续自交至第五代,获得转基因纯合系;同时将双拷贝转基因当代的不同整合位点分开,获得单一遗传背景下,不同整合位点,单拷贝的转基因纯合系。利用遗传定位方法,确定了其中4个整合位点在染色体上的位置。抗病性鉴定结果表明,不同整合位点的外源Xa21基因表达水平一致,没有显著差异。而不同遗传背景下,外源Xa21基因表达水平差异较大。这一结果表明不同整合位点对外源Xa21基因表达的影响不大,而遗传背景对外源Xa21基因表达的影响较大。 第二部分一个水稻多子房突变体的遗传分析与基因定位 水稻是单子叶植物发育生物学研究的模式植物。水稻分子发育的研究正逐渐成为植物发育生物学研究的热点课题。近年来有关花发育基因调控的研究已取得了一些初步的成就。本实验室从籼粳交水稻材料的高世系后代中获得一个多子房突变体,其表型为多个子房,每个子房上可以形成多个柱头,但雄蕊正常,能够正常结实,最后每个种子内可以具有多个米粒。暂定名为mp3(multipistill)。用突变体作父本与秀水11配制杂交组合,组合F2代群体单株性状调查结果野生型/突变型为1937/639=3.031,X2测验结果为0.051<X0.05,12=3.84,正常株与突变株的比例符合一对基因控制的分离比3:1,表明该突变性状是受隐性基因控