论文部分内容阅读
目的通过检测活化c-Jun氨基末端激酶(pJNK)、c-Jun氨基末端激酶-1(JNK1)及c-Jun氨基末端激酶-2(JNK2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达变化,探讨JNKs在缺氧性RTEC损伤中的作用。方法将体外培养大鼠RTEC随机分为正常组、缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧72h组四组。正常组细胞不做处理,正常条件下培养。缺氧24h组、缺氧48h组及缺氧72h组细胞建立缺氧损伤RTEC模型,分别于缺氧24h、48h和72h时收集细胞。光镜下观察细胞形态学改变;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-RCR)检测各组细胞JNK1、JNK2、α-SMA的mRNA表达。蛋白印记法(Western blot)检测各组细胞JNK1、JNK2、pJNK、α-SMA及p-caspase3的蛋白表达;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组RTEC凋亡率。结果(1)光镜下观察各组细胞,与正常组相比,缺氧24h组RTEC形态与正常组细胞基本一致;缺氧48h组细胞皱缩,细胞间隙增宽,细胞两端出现尖锐化;缺氧72h组细胞排列紊乱、稀疏,细胞塌陷,两级尖锐化明显。(2)与正常组相比,缺氧各组细胞的JNK1的mRNA及其蛋白表达、α-SMA的mRNA及其蛋白表达、pJNK蛋白表达和p-caspase3的蛋白表达均显著增加(均P<0.05),缺氧时间越长,增加越显著。与正常组相比,缺氧各组细胞的JNK2的mRNA及其蛋白表达均显著降低(均P<0.05),缺氧时间越长,降低越显著;(3)缺氧各组细胞凋亡率较正常组均显著增加(均P<0.05),缺氧时间越长,细胞凋亡率越高。(4)相关性分析:pJNK及JNK1的蛋白表达与α-SMA或p-caspase3蛋白表达均呈显著正相关(均P<0.01),而JNK2蛋白表达与α-SMA或pcaspase3蛋白表达均呈显著负相关(P<0.01)。结论在缺氧性RETC损伤中,pJNK和JNK1表达增加、JNK2表达下降均参与了RTEC损伤的发生发展。JNK1可能对RTEC缺氧损伤具有正向调节作用,而JNK2可能对RTEC缺氧损伤具有负向调节作用。