猪2型圆环病毒感染的PCR检测及甘肃株的同源性分析

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猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2, PCV2)病是当今养猪业严重关切的传染病之一,该病的广泛流行和蔓延已给世界各国养猪业的发展造成了严重威胁和经济损失。在现代化规模养猪场中,PCV2往往与其他疫病混合感染,发病率呈上升趋势。因此,为了有效控制这该病流行,减少由此引起的经济损失,本研究以PCV2当地流行毒株病料为研究材料,进行了基因克隆、分子结构特征分析、分子诊断以及流行病学调查,主要研究成果如下:1、参照GenBank己发表的PCV2基因序列,设计合成1对引物,对PCV2的ORF2基因进行PCR扩增,获得目的片段,经条件筛选,建立了PCR检测方法。采用该方法对甘肃9个不同地区规模化猪场的114份病料进行PCV2检测,阳性率达73.3%,证实甘肃规模化猪场普遍存在PCV2感染。2、对PCV2感染猪的症状及病理变化进行观察,结果表明,患猪主要表现为生长不良、腹泻及怀孕母猪流产等症状,患猪精神不振、消瘦,个别发生黄疽。剖检可见全身淋巴结显著肿大,肺脏出血、水肿以及发生肉样变等,病理组织学观察发现组织器官内淋巴细胞减少,生发中心内淋巴细胞消失,在巨嗜细胞内发现嗜碱性包涵体。3、通过ORF2基因序列比较发现GS0601strain和GS0602strain两个毒株ORF2序列差异较大,同源性仅为91.5%;其中GS0601strain与中国大多数分离株的同源性较高,达98%以上,而与欧洲及北美洲地区毒株差异较大,同源性仅为91%-93%;GS0602strain则相反,与中国大多数分离株同源性为90%-92%,与欧洲和北美洲株同源性相对来说较高,达94%-95%;此外还可发现大多数中国分离株与荷兰分离株的ORF2序列相似性较高。4、通过研究PCV2毒株遗传学特性及相互的亲缘关系,发现PCV2可分成两大组群,其中GS0601株与中国的13株分离株、荷兰的4株以及法国株同属一个组群,而GS0602则与两株中国分离株以及其它国家分离株属于另一个组群,也就是说甘肃张掖地区和白银地区流行的猪PCV2毒株具有一定差异性。
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